CIK细胞培养问题

xuchao717

我现在在培养CIK细胞，可是总是养不起来，细胞数量逐渐减少，我想问大家几个问题：" Z5 }/ }% [# z* H) w2 p" m
1.加入CD3，IL2，IL1后要刺激几天后换液？9 u$ ?6 L7 X! b% }2 h5 B
2.CIK细胞是悬浮培养的，可不可以用贴壁培养的瓶子培养？
* y! X( y: f1 l; o  L3.CIK在培养时候的培养瓶是立着培养的，还是躺着的？
# J- ]) G6 n- N" E& g) d4.刚分离出的单个核细胞接种到瓶子中，一定要4个小时马上将细胞接种到一个新的培养瓶吗？如果过夜后处理会怎么样？谢谢！！！

花饶然

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# g) |  a  G4 y0 w) o6 r2 `& S
8 ~+ B4 }, n+ T- Z  f. [* d1.，一般是刺激3天后，就可以换液或者是扩瓶3 }0 O4 k' m0 f* @* `4 }' L: Q  L
2.  可以用的，我自己就是用贴壁瓶子养的，它反正是 不贴的，与瓶子无关( [' {/ t5 D9 b. u( l4 V
3. 要躺着，这样和空气接触面积大4 x; R' q' H/ k( }
4.不需要，那是要诱导DC和CIK才需要将贴壁和不贴壁的部分分开诱导，如果你只是诱导CIK就没有必要

yuli521

第四天转瓶呀，不是换液吧，是转瓶或转袋，要调密度的，不知道你们用的是什么培养方案和培液？可以用瓶子养，躺着，但是扩的量不大，刚分出来的白细胞要放入提前包被的瓶子里进行刺激呀，之后第三天看是否需要补液，第四天转袋或瓶呀。

echo

1、有关CIK培养的文献很多，中文的就不少，一般关于换液和传瓶都有很好的介绍。基本的方法没有什么大的差别。
3 B* {3 J1 k7 o! b. @2、CIK细胞有一定的培养期，超过一定的培养天数，是会出现细胞减少的现象，不知道你需要培养多少天。个人经验，如果有实验要做，选择12-16天的比较好。( D% Y2 H- ]- }0 b
3、看CIK细胞是否可以扩起来，在第3天就可以初步判断出来。如果镜下的增值球很少或没有，基本上后面也扩不起来的。如果出现上述情况，可以考虑更换CD3。
% D' J6 N* W: N) H2 Q4、另外一个需要考虑的因素，是血的质量，必要是可以添加其他因子来促进其增值。" ^3 S' t1 Q0 M' |* L
但愿对你有点帮助。

echo

1、有关CIK培养的文献很多，中文的就不少，一般关于换液和传瓶都有很好的介绍。基本的方法没有什么大的差别。
2 L( G; }+ ?2 H2、CIK细胞有一定的培养期，超过一定的培养天数，是会出现细胞减少的现象，不知道你需要培养多少天。个人经验，如果有实验要做，选择12-16天的比较好。" n7 L* t% p  u/ @
3、看CIK细胞是否可以扩起来，在第3天就可以初步判断出来。如果镜下的增值球很少或没有，基本上后面也扩不起来的。如果出现上述情况，可以考虑更换CD3抗。
7 X7 @. d) ]% |7 |4、另外一个需要考虑的因素，是血的质量，必要是可以添加其他因子来促进其增值。; A% g7 T. v, N# A; d; [
但愿对你有点帮助。 # n9 }* t/ j- I/ p

xuchao717

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! S0 @- u) P1 N0 ]! T( S: t: ]2 V" y$ V7 T8 Z
谢谢你了， 我用的serum-free AIM-V medium 我的培养系统里没有加血清，CIK细胞能长好吗？

echo

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7 ?4 _. S' }8 q1 E6 l$ a  Z  l7 Q5 f) w6 i; N% l$ S& D
可以的，没有问题。

阳光正暖

第四天扩瓶或者补加培养基，不是换液吧，调整密度的，用瓶子躺着养

pauldong

回复 xuchao717 的帖子& ~, t. @/ O; G; O. f- e  g3 k

9 \& z+ b  U% d! P7 z4 E1. 一般接种当天加IFN-r，第二天加CD3单抗、IL-2，IL-1根据情况加不加都行，主要是增强细胞杀伤性，对细胞增殖不起作用，也有提前将CD3单抗在瓶底包被的，个人感觉扩增效果差不多，而且操作复杂一些。然后第3-4天就可以补液了，可以根据计数结果按照7-8*10的5次方密度补液，操作熟练了之后可根据经验判断，一般加倍补液，之后基本上细胞生长良好的情况下隔一天就得补液。" ^7 A0 i& f6 A- H7 x
2. 初期使用瓶子养的，但是一定要平放，而且补液多的情况下要传更多瓶子，我们一般到240ml后就转袋培养了，不然以后操作那么多瓶子很麻烦。7 Y5 H* I8 j9 V! R' ]9 h
3. 躺着培养，细胞之间密度依赖合适，对营养需求分布的也比较均匀，不然细胞都被重力作用沉到瓶底了，空气交换也受影响。
* B& {2 V, @" B! o& D4. 培养DC时需要将细胞贴壁两小时，然后把悬浮细胞取出培养CIK，如果只培养CIK则没有必要，过夜也没有影响，正常培养就好了。