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[请教] 两端LTR之间绝对不能有polyA信号是吗? [复制链接]

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楼主
发表于 2011-8-23 22:01 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

0 t9 ]$ ?! S3 z6 x3 W: L3 oRT,两端LTR之间绝对不能有polyA信号是吗?- ]7 ^7 U) U3 O6 M# g6 h/ N7 |
However, the fragment or cDNA must not contain a polyadenylation signal. The insertion of such sequences between viral LTRs can cause premature cleavage and polyadenylation during transcription of the viral genome. This interferes with the production of viable recombi-nant virions (Coffin et. al, 1997).
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沙发
发表于 2011-8-23 22:48 |只看该作者
回复 miRNA 的帖子
/ N6 T8 a; E) @' g! Q' V# e6 e+ B" d/ k
/ Y/ Y; z9 t- ^) _( D这个应该是指用病毒载体构建表达某个基因的载体时,需要注意的吧?建议你说一下这篇文章的目的,只选这一段好像很难准确理解。但是从这段话上来讲,就是在将目的片段或cDNA克隆到病毒LTRs中间时,不能带有加A的信号序列,否则会在后续转录中被切断,因为加A过程是要在信号序列处切开再连接上polyA的,这样,你转录出来的mRNA就不带有两端的LTRs,影响后续通过LTRs的重组发生。不知道我的理解是否正确,呵呵,欢迎指正!
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藤椅
发表于 2011-8-24 02:27 |只看该作者
是的,如果有的话,理论上包不出病毒。  我曾经审过一文章,试验设计是两端LTR之间有个polyA ,我高度怀疑他们所谓产生病毒,而且有TITER,唯一的可能是该polyA 信号很弱(实际不弱,比较常用的POLYA),所以有LEAK,包了极少病毒。 所以实验设计时要小心
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板凳
发表于 2011-8-25 01:33 |只看该作者
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但是相当多的基因,其都有多个3'UTR,长短不一,有些polyA信号就在另外一个转录本的里面,当然这可能跟基因的时空或者组织特异性表达有关,但是对于一个具体的实验来说,一个含有polyA加尾信号的长的3'UTR和CDS一块,能不能放到2个LTR之间,这是个问题,你们的意见嘞?
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