最近MSC老是被污染

lanceyu1980

最近提取SD大鼠的MSC， 原代细胞是72小时左右换的液（72hr内未见污染细菌），第一次换液（48hr）后一般出现细菌污染，第二次换液后剩下的一般细胞也污染了，操作过程是严格无菌的原则，同实验室的其他人在同一孵箱也没有这么高的污染，各位高手请问小弟在哪里除了问题，谢谢！

goodboy

我之前也做过原代细胞的培养，也一直不明原因的污染，到最后无法解决只能换课题了。希望楼主可以解决

lh_kitty

有没有考虑原代细胞提取的过程出现的污染，如果细胞间操作没问题的话。而如果你换液过程中已经发现了细菌，其实在没换液之前就已经污染了，细菌增殖也有一定时间间隔。一旦污染后，再换液肯定也无济于事了。我以前做过大鼠食管上皮原代培养，污染出现在取原代细胞的过程，后来注意在这个环节无菌后就没有污染了。

jhu132llh

楼上正解
( d0 n2 ^# s& V  x" V- P, `w其实原代培养污染的主要原因就出在取材的过程就发生了污染
& ?$ e- r. o  q6 T6 R# }+ [然后没发现
' e5 @, _- u: [$ v1 `等爆发了已经无法挽救了
. J, X9 s+ `4 `所以取材中的无菌是前提关键

李1二

回复 goodboy 的帖子" o' f: q( F$ |! b5 m3 [4 O8 N
4 w$ |' @0 C4 P2 _, _7 f+ N
也太衰了吧

李1二

我也不晓得为什么最近取得原代状态很差  死细胞太多了  一年前养得时候长得很好  现在看着就闹心  大家用的什么培养基  我去年用的低糖  今年用的高糖  是这个原因么  但是我看文献也有人用高糖呀

骨道边

你看看是不是培养液中没有加双抗啊，我就之前一直出现着这种情况，后来家了双抗之后就没有污染了

骨道边

你看看是不是培养液中没有加双抗啊，我就之前一直出现着这种情况，后来家了双抗之后就没有污染了

lanceyu1980

双抗我已经加了，原代出现污染的花是不是会在5天后爆发？谢谢啦！

若兰汀

首先你得明确是不是细菌污染，细菌污染一般培养基浑浊（当然黑胶虫污染后期也会黑胶虫污染，不过在污染后3天比较明显，前期难以发现）。无论是哪种细菌污染，24小时后都会有明显浑浊。如果你确定分离后72小时内无污染，那污染就出现换液环节。包括培养基，培养器皿，操作台，隔离服和手套等都可能是污染源头。如果你添加了青链双抗还有污染，那极有可能是抗生素失效了，如果是这个原因的话不能排除分离后72小时内就存在污染的可能（抗生素不能有效发挥作用，细菌经过漫长潜伏期后迅速生长）。不管怎么样，一定要注意各个环节的无菌操作，包扩动物消毒，器械，培养基及缓冲液，培养器皿，操作台，以及操作人员的隔离衣物。分离细胞很辛苦，祝你早日成功