ips克隆传代挑留的问题

573639471

最近一瓶iPS有点污染，加药后救过来了，但是克隆大部分分化，T25上有4-5个未分化的状态还好的，打算挑出来，不知道什么时间挑合适，是培养6天左右后长到一定大小，还是越早越好。具体用什么挑，怎么挑，还请指教，本人菜鸟，挑的过程越详细越好。

gact

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/ l$ }. A( B* d& A% y你们养ipsc使用瓶子养的啊？
$ I+ U- Q5 ~& Z( H挑取的时候不是很好挑的吧？
6 l* d3 r) S* m( O8 i, q0 j' v不用平皿?2 ?1 A& X; P1 U) p- G# f1 K
$ D8 Z+ P. r/ e1 G" X, w  l
用注射器划个井字，吸出就可以。

chinesezhang

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+ {* M* I& F5 X" x7 T2 a, U; K7 Z/ K( o2 s
需在体式显微镜下操作，我们用显微镊子直接将克隆挑在培养液中，然后接在新的皿中。

573639471

回复 gact 的帖子8 [! e+ a: Z* h  i/ b- m/ \! C. R

4 q  ^* X: @: K6 v你们一直都是用平皿吗？我一直用瓶子呢，还没挑过，传代是胶原酶消化下来，你们不用酶，传代也是挑取吗？
$ W7 ~. p; g/ _. J/ ]因为我们这老有污染，所有皿用的少。

573639471

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, Z$ o9 Y0 e  d. S& t3 g4 F$ {- x" W2 O0 e2 C1 d8 j
用枪头吹下来吸到新瓶中 行么？

dongxin

回复 573639471 的帖子" Z1 O$ {, `0 k5 x4 O1 B

' T1 y; i* [8 ~8 T建议先将瓶子中的细胞转移到皿中，再机械挑传。4 y: g: A2 Q/ C3 R8 g% ], Z
1. 可以将无菌巴氏吸管在酒精灯上略微烧烤后，迅速拉伸玻璃，呈120度角；用镊子在针尖合适位置夹断针尖；将针尖在酒精灯火焰上烧烤融化，得到封闭圆滑的针尖。9 K7 L! P1 _% L1 B/ U) Y$ ~
2. 在镜下，将为分化的细胞克隆分离开来悬于培液上，用移液枪吸取移至新的培液中！
' G& v; @7 `: b; T供参考，祝好运！6 M/ y& |4 ]+ r# ~2 [8 J! p2 L8 m

chinesezhang

回复 573639471 的帖子3 x( S9 t' P2 h) ^6 p5 l; q

0 v7 z2 W3 n9 B" h% m这样怎么区分开分化的和未分化的克隆呢？

sarah19860420

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9 G# t  m% D/ [, i( W* @8 T/ V! g* E5 k5 D" E) @1 a
好办法，O(∩_∩)O哈哈~，学习了

sarah19860420

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  o: a! _6 ]7 Q+ M2 ]: [) @3 b9 B7 c& F
你们用胶原酶消化的时间大概是多久呢

momocy

你说的污染指的是细菌等的污染么？我所知iPS污染了就会分化，一般不能救活。如果你的克隆长的比较好，你观察克隆中间有稍微长老的迹象，或者是克隆开始出现分化的时候就可以挑了，人的iPS的话，本身消化的时候，未分化的克隆会先掉下来，分化了的克隆会后掉下来，时间上有先后。或者，你挑的话，把枪头伸到瓶里面，轻轻吸出克隆，枪头够不到的话用比较长的移液管也行，需要在显微镜下操作的话可以把显微镜搬到安全柜里面，照一会紫外再用。如果你好的克隆比较多，分化的少，你可以把分化的吸掉，再整个瓶消化传代。