ips克隆传代挑留的问题

573639471

最近一瓶iPS有点污染，加药后救过来了，但是克隆大部分分化，T25上有4-5个未分化的状态还好的，打算挑出来，不知道什么时间挑合适，是培养6天左右后长到一定大小，还是越早越好。具体用什么挑，怎么挑，还请指教，本人菜鸟，挑的过程越详细越好。

gact

回复 573639471 的帖子
! F6 t( ]3 s+ t- W0 C0 ~* X
5 w/ J4 _7 q  q8 d$ E! j  |你们养ipsc使用瓶子养的啊？( z9 e! \  X( Q1 t
挑取的时候不是很好挑的吧？* F! M# u4 p) |# j. f, f) G
不用平皿?% R% k" M' U' t" R( E) Q$ n& c

  j9 Q7 Q( ~# i9 _用注射器划个井字，吸出就可以。

chinesezhang

回复 gact 的帖子* e) M( `! R$ q7 {$ l
( r2 J" Y- k# e8 P9 B2 h  U
需在体式显微镜下操作，我们用显微镊子直接将克隆挑在培养液中，然后接在新的皿中。

573639471

回复 gact 的帖子
' z2 X7 A# @3 o# \
# @6 j3 j8 r8 @$ V2 v' J$ d# {$ L你们一直都是用平皿吗？我一直用瓶子呢，还没挑过，传代是胶原酶消化下来，你们不用酶，传代也是挑取吗？
: a5 j0 G  Z" x因为我们这老有污染，所有皿用的少。

573639471

回复 chinesezhang 的帖子& j% D- g# y5 Z4 V, P* U' _- P

$ c9 F( d% ^$ f5 k7 @- t: R用枪头吹下来吸到新瓶中 行么？

dongxin

回复 573639471 的帖子$ @' J9 G+ M4 U9 T! M& f. y

' \2 A: s! a$ Z: B7 h建议先将瓶子中的细胞转移到皿中，再机械挑传。2 b. J4 o, d3 b. [
1. 可以将无菌巴氏吸管在酒精灯上略微烧烤后，迅速拉伸玻璃，呈120度角；用镊子在针尖合适位置夹断针尖；将针尖在酒精灯火焰上烧烤融化，得到封闭圆滑的针尖。
, J' v0 {. n# K1 W: s0 @/ N6 Q" A2 n2. 在镜下，将为分化的细胞克隆分离开来悬于培液上，用移液枪吸取移至新的培液中！+ e( u) f+ D2 |& i% v0 P% d# y
供参考，祝好运！! H+ n/ b9 s" T' T

chinesezhang

回复 573639471 的帖子: v' w* Y& M+ v
% w2 a8 \. e- Y6 _, u4 j! @$ D
这样怎么区分开分化的和未分化的克隆呢？

sarah19860420

回复 gact 的帖子
' {& d7 s+ o+ r7 t" G8 [7 g: o
6 C# \6 e6 d; n, O好办法，O(∩_∩)O哈哈~，学习了

sarah19860420

回复 573639471 的帖子
; o2 g: [1 r, [; }" X6 c1 D) R  }
你们用胶原酶消化的时间大概是多久呢

momocy

你说的污染指的是细菌等的污染么？我所知iPS污染了就会分化，一般不能救活。如果你的克隆长的比较好，你观察克隆中间有稍微长老的迹象，或者是克隆开始出现分化的时候就可以挑了，人的iPS的话，本身消化的时候，未分化的克隆会先掉下来，分化了的克隆会后掉下来，时间上有先后。或者，你挑的话，把枪头伸到瓶里面，轻轻吸出克隆，枪头够不到的话用比较长的移液管也行，需要在显微镜下操作的话可以把显微镜搬到安全柜里面，照一会紫外再用。如果你好的克隆比较多，分化的少，你可以把分化的吸掉，再整个瓶消化传代。