ips全军覆没，我该怎么办？

rongrong

回复 张也行 的帖子2 Y7 m, V; e& w, }8 v! _* L% |" F
5 g. z4 O! f  v
恩，算是几个细胞的小集落，但是边缘没有那么明显的界限，估计都不行了，我现在想起要养干细胞手都抖，不知道怎么来呵护它，他就会好好的。。。唉1

rongrong

回复 Yedan 的帖子
$ g) N5 b2 B% x* n8 R. b' I
7 P8 M8 R7 @! w7 C% t:'(我是用胶原酶消化的，然后复苏时要洗几遍，不断吹洗，离心，反正就成那了，我也不知道，没有吹很多次的

张也行

回复 rongrong 的帖子$ t; Q. Q" H( F7 b% N

5 q( N8 C& e9 \8 |* H8 Q. T我觉得是因为你复苏时吹打太剧烈造成的。你是高手，应该明白人的ES和iPS传代时都是传的小集落而不是单细胞，吹打的过于剧烈，小集落不容易生存，更何况是复苏的时候呢。
! X4 ?9 t3 L( ~/ G( }( H( _0 H
很奇怪你怎么知道贴壁的是单细胞呢？人的ES或iPS细胞单细胞应该很难成活吧，应该是几个细胞形成的小集落吧。

Yedan

回复 jefferson 的帖子$ F6 n5 _1 g0 S3 ]

. ~% ~( @  A2 ?; h应其龙的2i不是用在mES的Feeder-free的culture吗，在复苏的时候有用吗？求reference

Yedan

回复 rongrong 的帖子9 m, r( ?$ R5 P; W/ B9 h

/ {1 Y* s- `4 B% |) n1 a2 M其实一开始我还猜测LZ你养的是小鼠的ips呢……
8 X8 \5 D8 Y7 S9 d0 A你养的是人的ips，为什么会是单细胞？我们实验室都是用针划了传代的，不会消化成单细胞的，再说人的干细胞不能像小鼠那样打成单细胞的，养不活的……
, T: Y% v9 k3 s) t% M

Yedan

回复 oucflora 的帖子/ b" X6 {9 u# z9 d

( L/ R2 U: w: y# c: i您不是说LZ的10%DMSO浓度低了吗，所以我想请问您冻的时候用多少浓度，还有reference是什么。至于DMSO的作用就不用您解释了……

dilal

人的iPS细胞生长本来就很慢，既然有贴壁的细胞，为何不继续培养培养，看能否长起来。我们前一段时间买回来的miPS细胞也出现了这种情况，幸亏细胞收到后我们冻存了5管。传完代以后细胞大量漂浮，而且成团状，下面也有少量的细胞贴壁，换完液第二天同样出现相似情况。见帖子http://www.stemcell8.cn/thread-44333-1-1.html
" T/ q4 e% }3 U/ v当时怀疑是饲养层被支原体污染了，所以将细胞全扔了，剩下的冻存细胞一直没敢再养。最近一直在拿mESC摸索合适的培养条件。建议楼主暂时停下来，找到原因了再去养，查查是否有支原体污染或其它污染？

rongrong

回复 oucflora 的帖子, g4 H" T: Y/ D2 x
; y/ V! R9 W* o
还有那你们一般DMSO浓度到底用多大啊？

rongrong

回复 Yedan 的帖子$ _: X$ B2 G: x: V

+ P: m5 p8 `  C2 R" _是人的，800转看起来是全部离下来了，我听别人说他们都是静止放5分钟就好，主要我得细胞都变成单细胞了，不再像以前那样一个个克隆了，总是离心，吹打这样不会影响细胞的存活吗？再说刚复苏的细胞这样折腾能行吗？我就是想看看大家都是怎么复苏的？

rongrong

回复 evial 的帖子
# [8 d4 y% C! o" C& D/ v. A# s5 w# [2 N) [' C: c% Z( O+ P3 S
英文版是啥啊？我是新手，好多东西费了包包但是不能下载啊