关于lipo2000转染的问题

guo6259

最近在做lipo2000转染293T包装逆转录病毒。用GFP做阳性对照。我的步骤是10cm盘293T密度500万过夜。12小时后转染，转染前换液。lipo（39ul）+opti（1.5ml）混合5min（轻轻吹打10下），DNA（15ug）+PCL（15ug）+opti（1.5ml）混合再和前者（lipo+opti）一起混合20min（轻轻吹打10下）滴加到293T盘中。包装病毒。大概72小时后观察。发现效率不是很高，没有达到90%。望诸位高手解答。谢谢！！

trl137

很多研究机构都有的，你可以通过一定的关系索要

huangcong1988

回复 trl137 的帖子: X. g: W7 `* ~6 j2 {/ M

! O8 n7 m% t% T5 a想问问您293T哪里买的

huangcong1988

回复 guo6259 的帖子
( i! y: P" R" C, C; Y! m
+ F! z  ]2 x+ f# ]想问问您，您的293T细胞哪里买的？

kexiaoxue

我最近也想做lipo2000转染293FT包装逆转录病毒，不知293FT是否与293T一样，各位大侠能否介绍详细点，新手好好学习一下。弱弱的问一句：“DNA（15ug）+PCL（15ug）+opti（1.5ml）”中PCL是什么？

trl137

我也做过用病毒包装293T，也是lipo2000转染。你转染的效率已经很高了，一般达到70%左右就很不错了。而且在转染后6~8小时换液，24小时观察转染效率，你在72小时才观察，可能lipo2000存在时间太久对细胞有毒害作用。

juan880929

将DNA的量增加到24ug，脂质体的量增加到60ul。我们都是这样转的

amosummer

90%？我从来没有达到过，有70%左右就很不错了。

不倒翁

我们一般都悬浮转的 这样效率会高一点 但是转染结束最好6-8小时换液 细胞不能太少 否则会死地很厉害6 x# B5 v& I. Z

varing

悬浮感染会不会好些？293T悬浮时未贴壁前转染