急求诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞较好的诱导剂

jianghaixiang

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- y9 @; C* A% R# p3 E+ D  z- B- H# x1 W' ^# `
这个建议不错，我也想过这么做，只是怕诱导率不高没急于动手，等这批细胞长出来我试试，谢谢！

chenjiahuan

你可以加点维生素C和五氮胞苷

jianghaixiang

哦，这个信息很重要，我也是悬浮了2d，但是诱导时间从加药处理开始算，你算出的10d是从悬滴的时候开始算的吧？对了，你是在细胞贴壁多长时间后加药诱导的呢？

xiaoyurly

拟胚体无需诱导也会跳动，不知你在诱导过程中拟胚体阶段多长时间？
! _4 \- f& l8 U) _8 k我们一般只放2d，然后挑选较大的放到明胶盘里让其贴壁分化，一般到第10d（从诱导开始，包括拟胚体阶段）左右每个拟胚体都有跳动的区域出现。
* E) s! {3 g8 `# K+ D6 r  V个人经验，拟胚体阶段不要太长，否则心肌分化会被其他分化冲淡。
2 I) T7 c% F: \8 h加诱导因子也是在贴壁分化开始之时。

jianghaixiang

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) D6 H  a7 M5 \+ l' m  e( t
. u" {: |) X) F% Y( ^谢谢！就是因为不能使用生物因子类，所以很为难。我用抗坏血酸试过诱导，很庆幸有心肌细胞的跳动，但是跳动时间维持不了多久，还有就是我觉得拟胚体的大小会影响心肌细胞分化的结果，因为个体比较小的拟胚体就没有出现心肌细胞的搏动。不知你们的结果是怎么样的？

xiaoyurly

完全不添加任何生物因子么？这个要获得大量的诱导心肌细胞有一点点困难，也比较难做到。6 s+ {  z- f5 e" o! c
现在很多诱导方法都是在细胞因子诱导的基础上锦上添花的。
& C7 f' B4 Q) E其实5-aza效果还可以，毒性也不是很大，用于诱导的胚胎细胞基数大些也能实现。

jianghaixiang

回复 yibo10679 的帖子
5 a/ f) W2 G/ z# Y3 N
. E( O. x! g7 E  K: f, ]谢谢yibo10679 ，自发分化率太低，然而DMSO和5-氮胞苷有毒性，而我所做的内容首先需避免细胞因子的加入，所以这些都排除了。我看到有文献说抗坏血酸有诱导作用，不知其作用如何？

yibo10679

通过类胚体自发分化，有一定分化率
: O7 B9 Y4 D1 n2 ?添加DMSO也可以适当提高分化率，但效果有限，不稳定
+ P6 g9 G4 P1 n* }9 v8 `5-氮胞苷也可以试一试. m7 a' B7 M2 c8 ]2 o
再有就是细胞因子了，比如bFGF和BMP4等( g4 U7 f' B3 r) ]& i
当然一可以考虑使用转基因的方法5 ~( W4 e9 `( }3 E+ O5 |7 h5 P  y

jianghaixiang

回复 xiaoyurly 的帖子% a: C4 N. |3 Y; _- ], Y. j/ r' X  a
0 x- H4 n: c* Z) ^; C& S
谢谢，但是我的诱导方法必须避免如bFGF等生物因子的介入，不知你是否有做过这方面，能不能提示一点相关的无毒的诱导率较高的诱导剂、诱导时间及其其用量等。

xiaoyurly

现在这种诱导方法不是很成熟了么，很多文章的protocol都写得很详细。主要用bFGF和BMP4两种因子，能得到较高比例的心肌样细胞