急求诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞较好的诱导剂

jianghaixiang

回复 chenjiahuan 的帖子
* F" @0 L4 B2 G) S$ x0 I3 Y6 m5 y7 S5 R/ K4 P  R/ G1 _
这个建议不错，我也想过这么做，只是怕诱导率不高没急于动手，等这批细胞长出来我试试，谢谢！

chenjiahuan

你可以加点维生素C和五氮胞苷

jianghaixiang

哦，这个信息很重要，我也是悬浮了2d，但是诱导时间从加药处理开始算，你算出的10d是从悬滴的时候开始算的吧？对了，你是在细胞贴壁多长时间后加药诱导的呢？

xiaoyurly

拟胚体无需诱导也会跳动，不知你在诱导过程中拟胚体阶段多长时间？
1 a  W( s: m. F% {% |我们一般只放2d，然后挑选较大的放到明胶盘里让其贴壁分化，一般到第10d（从诱导开始，包括拟胚体阶段）左右每个拟胚体都有跳动的区域出现。
1 l/ y: E, ~3 i个人经验，拟胚体阶段不要太长，否则心肌分化会被其他分化冲淡。7 b. }6 _& ?6 n0 \
加诱导因子也是在贴壁分化开始之时。

jianghaixiang

回复 xiaoyurly 的帖子% x/ H5 l6 ]( S

1 e1 J% f( Y( k. @! U谢谢！就是因为不能使用生物因子类，所以很为难。我用抗坏血酸试过诱导，很庆幸有心肌细胞的跳动，但是跳动时间维持不了多久，还有就是我觉得拟胚体的大小会影响心肌细胞分化的结果，因为个体比较小的拟胚体就没有出现心肌细胞的搏动。不知你们的结果是怎么样的？

xiaoyurly

完全不添加任何生物因子么？这个要获得大量的诱导心肌细胞有一点点困难，也比较难做到。3 r4 m9 N% l" f2 @# Q- o
现在很多诱导方法都是在细胞因子诱导的基础上锦上添花的。
+ c  i1 y& Q; C9 A其实5-aza效果还可以，毒性也不是很大，用于诱导的胚胎细胞基数大些也能实现。

jianghaixiang

回复 yibo10679 的帖子3 b$ ?- [# ]- B- x2 F- N

- ~$ m0 U0 q% P4 {- U9 i8 w% [谢谢yibo10679 ，自发分化率太低，然而DMSO和5-氮胞苷有毒性，而我所做的内容首先需避免细胞因子的加入，所以这些都排除了。我看到有文献说抗坏血酸有诱导作用，不知其作用如何？

yibo10679

通过类胚体自发分化，有一定分化率
& P, r" b4 U/ N添加DMSO也可以适当提高分化率，但效果有限，不稳定! `: W3 c8 |. x2 Y
5-氮胞苷也可以试一试2 Z5 r5 w% N1 M! W1 X
再有就是细胞因子了，比如bFGF和BMP4等2 n- t  t& ~$ h4 i! j( `9 \
当然一可以考虑使用转基因的方法
5 \! _' h/ |* t" v2 F

jianghaixiang

回复 xiaoyurly 的帖子/ x; P5 J  @, S2 Q0 Q
8 h0 K+ J; Z& _& s) d5 d
谢谢，但是我的诱导方法必须避免如bFGF等生物因子的介入，不知你是否有做过这方面，能不能提示一点相关的无毒的诱导率较高的诱导剂、诱导时间及其其用量等。

xiaoyurly

现在这种诱导方法不是很成熟了么，很多文章的protocol都写得很详细。主要用bFGF和BMP4两种因子，能得到较高比例的心肌样细胞