细胞怎么挑单克隆啊

echowdk

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% A, b. v: n$ o. w0 o" _7 @9 Y: r3 d0 v
请问你指的是什么细胞？另外，你要做什么样的实验，这些应该再交代清楚些啊。
0 f0 \# K4 W2 q8 Q% w9 n在建立一个新的ES细胞系或者其他什么细胞系（外源基因过表达或者敲出/低)的时候是很忌讳将细胞克隆全部消化，因为这样的话阳性细胞、阴性细胞就全都混到一块去了。! a( a8 Q! I8 o( ?- a4 ^% i
建议你看下小鼠胚胎操作，上面有详细的挑克隆的步骤。' ^, S8 a6 j: `0 P$ F: h
一般是：9 s% x  h5 q, ]2 G( }1 N/ Q
1、将旧的培养液吸掉，向培养皿中加入适量的PBS（防止挑克隆是细胞干涸）。: ]3 M8 x2 c" V0 y0 q5 p
2、准备适当体积适当浓度的胰酶（我一般是用50ul 0.25%的TE），37度预热。  |/ w. W' t  G* _; I2 [
3、在显微镜或者体视镜下，用200ul的移液器（带枪头）对准要挑取的克隆（若是ES克隆的话，先将该克隆周围的feeder划开），一抽吸，克隆就被吸到tips里了。" Y  i6 |4 v* f
4、将该克隆转移到预热好的TE里消化（若是ES克隆的话，消化<5min，都OK）。
+ [3 ~( @1 a+ X$ X5 v, Q) c5、相同体积的培养液中和，然后铺到相应的孔板中（ES克隆，我们铺到24孔板的一个孔，完全没问题）。