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回复 pla269 的帖子9 ^! `: B Y) c; h
- A* g! Q) ^" ], R
请问你指的是什么细胞?另外,你要做什么样的实验,这些应该再交代清楚些啊。5 V7 p! t2 ]# h( b$ r# p% X, S/ g1 e; \
在建立一个新的ES细胞系或者其他什么细胞系(外源基因过表达或者敲出/低)的时候是很忌讳将细胞克隆全部消化,因为这样的话阳性细胞、阴性细胞就全都混到一块去了。/ y1 h, C" K* m
建议你看下小鼠胚胎操作,上面有详细的挑克隆的步骤。' C9 @5 t% u0 i+ R
一般是:; p# X& i; a2 q5 `
1、将旧的培养液吸掉,向培养皿中加入适量的PBS(防止挑克隆是细胞干涸)。
* D; n9 ^& h$ C9 O2、准备适当体积适当浓度的胰酶(我一般是用50ul 0.25%的TE),37度预热。
, h# `4 j4 j0 i ~: z, X3、在显微镜或者体视镜下,用200ul的移液器(带枪头)对准要挑取的克隆(若是ES克隆的话,先将该克隆周围的feeder划开),一抽吸,克隆就被吸到tips里了。! o$ G5 e8 s- I* B7 Y1 _, f) A
4、将该克隆转移到预热好的TE里消化(若是ES克隆的话,消化<5min,都OK)。
; g2 |. @7 J ~$ G/ o! Z. w( n9 ^$ Y5、相同体积的培养液中和,然后铺到相应的孔板中(ES克隆,我们铺到24孔板的一个孔,完全没问题)。 |
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