干细胞插入GFP

varing

想在干细胞中插入GFP让干细胞可视化，实验室有plove系列的慢病毒载体，但plove载体的启动子为CMV，有点悲剧了，不能用在干细胞中。问下其他同学，在干细胞中插入可视化基因你们呢一般用什么启动子？PGK?CAG?
* I0 J5 ^8 y+ O0 V& y另，哪位童鞋有适合在干细胞中表达的慢病毒载体，能否惠赠本人？

echowdk

# P, B0 n1 R" c$ ?

6 l8 b, I2 G/ G9 `) L( h回复 varing 的帖子  v- }3 p- C, j* _6 j  o0 `  x- ]
2 ]& A+ s$ ?" A
我一般就用普通的过表达载体来转染干细胞，没怎么用过病毒载体。& B- o8 c. Q* O- ]
用含有EF-1a或者beta-actin启动子的载体做的话，效果还不错，这二者我都验证过。
1 m: o# [: x; a  W+ _; \8 j. hPS：我们这边有位师兄用以CMV为启动子的病毒载体转染干细胞，据说没有表达量低的问题，不知道真假。

jhu132llh

CMV为启动子的转染干细胞效率是不怎么高
& t% {  ~% M/ X# f1 p4 F7 X( K但也不是完全没有
/ X: \* }/ N2 r: N: f0 b5 f5 Z实在不行可以试试的* X9 ^4 _2 @; S1 Y) W/ o
PGK和CAG都还可以

juan880929

一般EF1α的启动子比较好
6 c- G8 o+ P( J& x0 ~% O我们一般都是质粒直接转染，没有用过病毒' O% c. A+ g! i6 y2 @# L
但是我们试过CMV的启动子，的确会被逐渐沉默

王乾

CMV不是最好的，但是也可以用，我试过。* o% P# U9 ]  V9 }% k
比较常用的是CAG,PGK，EF1a和UBC promoter，他们几个在肝细胞中表达比较高。

llecstem

我转了几次带CMV启动子的载体ES都不亮，以为是电转的问题，但看到一篇文章里用pEGFP-N1转ES细胞就没有问题，它的启动子是pCMV IE（immediate early promoter）

inno

PGK和CAG比较常用，效果还行

shagu

回复 varing 的帖子- b. d( R8 t5 t" a: W4 C
  T0 P" U' ]* H" J2 q% f! r. G
前辈，我现在也要做大鼠MSC携带GFP来示踪，轻问您是用什么做的载体？有具体步步骤更是感激不尽~~