干细胞插入GFP

varing

想在干细胞中插入GFP让干细胞可视化，实验室有plove系列的慢病毒载体，但plove载体的启动子为CMV，有点悲剧了，不能用在干细胞中。问下其他同学，在干细胞中插入可视化基因你们呢一般用什么启动子？PGK?CAG?
( a3 L+ \! r' q8 l另，哪位童鞋有适合在干细胞中表达的慢病毒载体，能否惠赠本人？

echowdk

+ M) N+ J7 N4 ]1 h5 A% p
- P7 Y5 I9 N  @回复 varing 的帖子
3 W% P! B1 V" ~1 }. j7 W3 g4 }0 {/ Z2 K, C% K1 S0 @( B
我一般就用普通的过表达载体来转染干细胞，没怎么用过病毒载体。5 N# k' {3 w. J5 M1 h$ I2 t
用含有EF-1a或者beta-actin启动子的载体做的话，效果还不错，这二者我都验证过。
6 {1 g+ Q, f: K' NPS：我们这边有位师兄用以CMV为启动子的病毒载体转染干细胞，据说没有表达量低的问题，不知道真假。

jhu132llh

CMV为启动子的转染干细胞效率是不怎么高  H2 o, |$ j0 f8 b$ w3 N4 T8 _  `
但也不是完全没有
5 w! c8 Z' V8 _( S实在不行可以试试的
1 _  l) I% @7 ?. |9 x: ZPGK和CAG都还可以

juan880929

一般EF1α的启动子比较好* g/ K; @' L, h* Z7 ], i; q
我们一般都是质粒直接转染，没有用过病毒% X# T3 ^  Z9 Q; U
但是我们试过CMV的启动子，的确会被逐渐沉默

王乾

CMV不是最好的，但是也可以用，我试过。
1 S  u. E5 Y* o8 E8 V# d比较常用的是CAG,PGK，EF1a和UBC promoter，他们几个在肝细胞中表达比较高。

llecstem

我转了几次带CMV启动子的载体ES都不亮，以为是电转的问题，但看到一篇文章里用pEGFP-N1转ES细胞就没有问题，它的启动子是pCMV IE（immediate early promoter）

inno

PGK和CAG比较常用，效果还行

shagu

回复 varing 的帖子: O2 ?7 M  p. |+ C  |

1 V' o& e, W6 L& O. F: K前辈，我现在也要做大鼠MSC携带GFP来示踪，轻问您是用什么做的载体？有具体步步骤更是感激不尽~~