胚胎差异染色

future007

我想请教一下大家，谁做过胚胎差异染色，为什么我染完以后，PI和honcest的荧光都同时染上了内细胞团和滋胚层。根本分不清哪里是滋胚层，哪里是内细胞团。我的实验方法是配置1%trition-x100，把PI融于1%trition-x100中，honcest溶于PBS（—）中，先把胚胎放入PI中15s，再移入honcest中37度孵育5分钟，请大家帮我分析一下原因，谢谢了

echowdk

回复 future007 的帖子( ]; Q0 F, V, _( X: X& W
$ e' i4 l- f7 f0 e: C# M% {; _
PI和hochest不都是染细胞核的试剂吗？我的经验是PI没有hochest的效果好，所以我染核都是用hochest染。& z/ R+ I2 i; M# n- u8 p4 x' i
浓度的话不要太高，1ug-10ug/ml即可，溶于PBS-PVP中就好了，或者是水，另外染色的时候放室温就可以了，时间小于15min都OK。! j9 L* P, c- }& T% B# [
做胚胎免疫荧光，尤其是染blastocyst，胚胎的“摆放”也很有讲究，如果摆放的不好的话，有的时候就不能凸显出内细胞团和滋养层了。所以建议你在体视镜下先用拉的针将胚胎的位置摆放好后再放盖玻片。

zpzp0312

这个方法是为了发文章，才设计出来的  Y5 b& Y8 S" i2 s% B1 H7 S
呵呵
- E! ^! m. s, K. ?) z2 W) |我对它的评价较差

天地之间

区分染色是为了观察囊胚的质量而设计的方法，hochest可以将死亡细胞和活细胞染成蓝色，pi只将死亡细胞染成红色。两张片子合在一起可以看出活细胞和死细胞的数目比，从而确定这枚囊胚的质量。lz做的什么胚胎啊？

gardenia

胚胎差异染色的话，将胚胎放入PI里，显微镜下观察胚胎颜色的变化，一般10秒-12秒，迅速将其移到hochest里，将周围连带的PI液匀开，放置在里面的时间比在PI里的长些，再压片拍照即可，一般在室温下进行！
: M5 f+ e, G$ _* J

future007

回复 gardenia 的帖子1 m! h  q+ ^. G: V

9 ^$ }# H6 P( b- G( K- a6 P" c显微镜下看胚胎颜色变化，开着荧光看，再加上操作时间，10-12秒我觉得搞不定，怎么也得40秒才能移到hochest中。这样胚胎染的时间肯定过长了

future007

回复 zpzp0312 的帖子
8 w' O! s$ j6 ~) {; G6 q3 J
6 u7 |$ s7 A" u/ r. l/ _$ D* p0 l- P这个我同意。

future007

回复 天地之间 的帖子/ @+ l4 S8 N- e3 o( i
  u5 X: S! e% `+ S% @# Y9 y
牛的

future007

回复 echowdk 的帖子
: `, o5 c' j& f& f
1 _4 T/ G& [4 d# B, b# J我想做的是分染，就是用红色和蓝色把滋养层细胞和内细胞团区分开来，所以不能单用一种染料