关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

最近想做人骨髓间充质干细胞，上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC，具体分离液是FYCOLL和PERCOLL，想请有经验的战友推荐下哪个分离液好，并烦请写一下具体的操作程序。谢谢！！！

wcforever126

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$ I- t% f" m% O# @$ l2 u* y0 i9 ]& a  \# }& k9 a9 V% ]
请问您用的FICOLL多少密度的8 P; q4 |# M& m0 d

wangweilie0418

不好意思，骨髓稀释液：FICOLL=2:1
5 ~" H% }+ E5 E3 v

wangweilie0418

pbs：骨髓液=1:2        骨髓稀释液：FICOLL=3:1
( M% y0 H' V5 H1 F9 O  i

琛儿326

回复 sunjianhua2000 的帖子. g. ]1 R5 \$ o

  \5 F0 a" w3 Q, B" C我们实验室用以下比例2 p: X+ I: I  B, d5 Y
pbs：骨髓液=1:3，
& L6 R2 r9 z* l骨髓稀释液：FICOLL=2:11 @( _* _/ U0 S

sunjianhua2000

pbs与骨髓稀释比例是多少，骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少？

wangweilie0418

观察骨髓血有无凝血. q6 |( l4 J9 Z/ z
↓
) @5 e2 f  V( P: E2 O5 S  nPBS补加至毎管45ml（毎管血量尽量均匀），1800转∕分钟，10分钟。, I& E! M) z* w3 o4 G" d8 U
↓7 \6 k$ M9 w  f$ j5 {  B
弃上清，将沉淀用PBS重悬，毎管补加PBS后共30ml。
8 V- R: G: a& K+ f8 R* d/ K取已分装好的Ficoll（15ml∕管）将上述重悬液缓缓加于Ficoll上  O% d% O! y' O4 S
2500转∕分钟，20分钟8 L* r. Y1 l8 `  R/ b) V1 [9 f% ?
↓7 f) L2 \! z# X1 ~6 y
吸取白膜层，补加PBS至45ml，1500转∕分钟，8分钟。3 d* |; m4 {( L: ], I
↓0 f$ V/ }! B0 F& [
取沉淀，加PBS至45ml，1200转∕分钟，3分钟。# P7 z1 A/ a. H, L
↓
; B' S7 q5 T2 K( O4 v重悬，培养。
. `( M5 X; I4 U  J, v' H0 T2 o) a* ]' r

人在日本

用什么梯度分离啊，直接打到七号钟头里过一遍就行了，又快又省事