关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

最近想做人骨髓间充质干细胞，上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC，具体分离液是FYCOLL和PERCOLL，想请有经验的战友推荐下哪个分离液好，并烦请写一下具体的操作程序。谢谢！！！

人在日本

用什么梯度分离啊，直接打到七号钟头里过一遍就行了，又快又省事

wangweilie0418

观察骨髓血有无凝血* q. S8 l; h: N) j, T9 w
↓/ V4 x( q" u$ J# c1 B6 w
PBS补加至毎管45ml（毎管血量尽量均匀），1800转∕分钟，10分钟。
- ^8 \' Q* x* d% v5 ]4 @↓  l* n' e- P- @0 M
弃上清，将沉淀用PBS重悬，毎管补加PBS后共30ml。
3 s4 |, O  y- F/ ~  `取已分装好的Ficoll（15ml∕管）将上述重悬液缓缓加于Ficoll上
1 b( {3 k1 Y) ~' ^1 M' _' U2500转∕分钟，20分钟
* J5 G, B* C1 I. D- A↓( s8 L1 Q$ A( ?% {; O2 I
吸取白膜层，补加PBS至45ml，1500转∕分钟，8分钟。9 r$ T; k# u: K: r* X; ^
↓4 v& Y8 m$ Z, G  F* U
取沉淀，加PBS至45ml，1200转∕分钟，3分钟。  p7 w6 r. y7 G, d% Z8 v
↓
7 P4 R; n2 c& Y: N& h2 t% I重悬，培养。) T' I5 T  n, w* v  D% H

sunjianhua2000

pbs与骨髓稀释比例是多少，骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少？

琛儿326

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) Q4 A/ k" U) b# k5 B4 A" f: l$ m% n( e- v3 a% W; w! H
我们实验室用以下比例
0 V" d9 t9 X4 _0 y( jpbs：骨髓液=1:3，# I) W9 p( t7 [1 U/ @8 A- B, Q, T
骨髓稀释液：FICOLL=2:1+ \( d% o" s# q( ?# [# F

wangweilie0418

pbs：骨髓液=1:2        骨髓稀释液：FICOLL=3:1
2 ^! T4 G' j8 H; b, |6 d

wangweilie0418

不好意思，骨髓稀释液：FICOLL=2:1/ ~3 P4 C5 o, C- P0 j) \7 I, h

wcforever126

回复 wangweilie0418 的帖子2 o2 G7 J+ t7 B  j1 o6 w

- J7 G' G8 [& {3 [$ i& t6 X请问您用的FICOLL多少密度的
) j( c2 E7 z, f  Z1 i