关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

最近想做人骨髓间充质干细胞，上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC，具体分离液是FYCOLL和PERCOLL，想请有经验的战友推荐下哪个分离液好，并烦请写一下具体的操作程序。谢谢！！！

人在日本

用什么梯度分离啊，直接打到七号钟头里过一遍就行了，又快又省事

wangweilie0418

观察骨髓血有无凝血! k9 o. j4 C, K: Y  O
↓6 k9 R* t5 U& q) Q1 d- L/ b
PBS补加至毎管45ml（毎管血量尽量均匀），1800转∕分钟，10分钟。# x9 C" }5 b0 {5 _5 J. ~9 K, _6 t: s
↓
. d3 R$ W3 E. J! f4 @4 R4 E' |弃上清，将沉淀用PBS重悬，毎管补加PBS后共30ml。
4 k3 W) H. ?, N8 e取已分装好的Ficoll（15ml∕管）将上述重悬液缓缓加于Ficoll上$ s5 k% V: C$ c. z
2500转∕分钟，20分钟% r7 Z8 z4 q& h4 O4 Z( P& h7 |
↓
& G: c0 g% _7 i* U吸取白膜层，补加PBS至45ml，1500转∕分钟，8分钟。
% J# F- m% t' `. p& v↓
' _* j" P  _: c& S/ P' ?取沉淀，加PBS至45ml，1200转∕分钟，3分钟。" f1 |0 c) s  p3 C5 `  E
↓
4 V9 D5 B" a% I0 J. y2 b重悬，培养。
9 Y/ }' f( C* w

sunjianhua2000

pbs与骨髓稀释比例是多少，骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少？

琛儿326

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  p$ Q4 W& s/ L) K9 e3 [1 d+ ]* J$ ~" J4 U0 b& ]/ C
我们实验室用以下比例
1 U1 V2 I8 F( A  |5 C) p% t8 W2 zpbs：骨髓液=1:3，
" ^5 s% n; A$ y4 c* @4 [骨髓稀释液：FICOLL=2:1  J- C% K# A: y( k( x! }

wangweilie0418

pbs：骨髓液=1:2        骨髓稀释液：FICOLL=3:1
9 x" c1 w- `+ M) s

wangweilie0418

不好意思，骨髓稀释液：FICOLL=2:1
7 k" p. B9 m4 @8 Y

wcforever126

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7 D3 D/ t6 @% l, g, B* }+ _1 t+ a
. D6 e7 i$ I, G" @请问您用的FICOLL多少密度的
- |8 i" A$ _; ]1 x8 }6 u$ \