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关于人骨髓间充质干细胞培养方法 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-9-27 21:34 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近想做人骨髓间充质干细胞,上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC,具体分离液是FYCOLL和PERCOLL,想请有经验的战友推荐下哪个分离液好,并烦请写一下具体的操作程序。谢谢!!!
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沙发
发表于 2011-9-28 00:26 |只看该作者
用什么梯度分离啊,直接打到七号钟头里过一遍就行了,又快又省事
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藤椅
发表于 2011-9-28 08:43 |只看该作者
观察骨髓血有无凝血6 a4 Q4 A4 n' y# M9 P2 Y6 x
. s9 l- c( K4 R5 i7 {3 ~
PBS补加至毎管45ml(毎管血量尽量均匀),1800转∕分钟,10分钟。
2 Y: j* B: H6 ^' k* w! G' y7 V
8 i: z0 ]; M- v弃上清,将沉淀用PBS重悬,毎管补加PBS后共30ml。
3 J5 z- M2 v# ~) Z. W3 V6 t5 P取已分装好的Ficoll(15ml∕管)将上述重悬液缓缓加于Ficoll上
$ a4 l6 [# e: \, b! l& V2500转∕分钟,20分钟, g; J$ R0 j  F- [

/ ]# k* y4 q- d7 [" p) V* T7 `+ j  H  D吸取白膜层,补加PBS至45ml,1500转∕分钟,8分钟。
' b& R' Q" j2 N/ |6 O" u" t$ A+ \: a$ o# N9 _" Q
取沉淀,加PBS至45ml,1200转∕分钟,3分钟。
! B; l. v0 h/ d; x, ?  Z. h# z$ p- k' H5 T+ n) p4 [
重悬,培养。9 \" _7 h- w! X4 ?. |( J: Y
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板凳
发表于 2011-9-28 16:36 |只看该作者
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pbs与骨髓稀释比例是多少,骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少?
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报纸
发表于 2011-9-28 17:09 |只看该作者
回复 sunjianhua2000 的帖子+ ?* V) y. E* Y% U0 N' R% M' c8 _
# }' g0 W3 O) k! @) i; _; |: g( O
我们实验室用以下比例+ y( G1 d' g3 r: D
pbs:骨髓液=1:3,
- t) O, \; |: S& d, Y/ o! @骨髓稀释液:FICOLL=2:10 E( J& U1 d0 y- `' C8 b
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地板
发表于 2011-9-29 09:48 |只看该作者
pbs:骨髓液=1:2        骨髓稀释液:FICOLL=3:1" @! j7 L: Y7 t+ M8 E& j0 p
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发表于 2011-9-29 09:49 |只看该作者
不好意思,骨髓稀释液:FICOLL=2:1
5 [, r. K. t% P  W* i

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发表于 2012-7-29 21:21 |只看该作者
回复 wangweilie0418 的帖子
2 r: s4 V3 G- X0 T! d; Q, F3 I. z- c4 D" O
请问您用的FICOLL多少密度的
" _3 f/ d+ W/ T5 V( V9 s5 W  R
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