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关于人骨髓间充质干细胞培养方法 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-9-27 21:34 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近想做人骨髓间充质干细胞,上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC,具体分离液是FYCOLL和PERCOLL,想请有经验的战友推荐下哪个分离液好,并烦请写一下具体的操作程序。谢谢!!!
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沙发
发表于 2011-9-28 00:26 |只看该作者
用什么梯度分离啊,直接打到七号钟头里过一遍就行了,又快又省事
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藤椅
发表于 2011-9-28 08:43 |只看该作者
观察骨髓血有无凝血% i. {# H: J5 @" t% \
% D8 ]6 ^8 y% m  o
PBS补加至毎管45ml(毎管血量尽量均匀),1800转∕分钟,10分钟。
. I# D1 X! k' v. E: `* p
0 B0 X* {* |1 l; m, y3 ^  k弃上清,将沉淀用PBS重悬,毎管补加PBS后共30ml。. H4 V" w* E" t4 K
取已分装好的Ficoll(15ml∕管)将上述重悬液缓缓加于Ficoll上
! w# f6 \. c" r9 Q; V3 }4 H2500转∕分钟,20分钟
( E9 v/ Y6 M- T8 R% Z) v7 m) `# y; Q. F. y
吸取白膜层,补加PBS至45ml,1500转∕分钟,8分钟。
6 y* ]* J5 x* B3 m" O; m/ @- `' ^& @4 D& ~. j8 s
取沉淀,加PBS至45ml,1200转∕分钟,3分钟。. N) H$ |* d7 Z6 u* z! i

& m) _  L# z+ i: b2 D# y: b7 `重悬,培养。
. l8 t# m$ z/ F
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板凳
发表于 2011-9-28 16:36 |只看该作者
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pbs与骨髓稀释比例是多少,骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少?
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报纸
发表于 2011-9-28 17:09 |只看该作者
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: ]* C+ E8 i% }1 S6 D; Q; Y
8 ?6 F* M5 j) ?  Z8 G我们实验室用以下比例
  K/ Z; x) {( K3 T5 o. B8 _: ^pbs:骨髓液=1:3,
$ d) H8 r6 {; V9 _% [骨髓稀释液:FICOLL=2:14 v! s, q* S- q1 E# U0 T  @
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地板
发表于 2011-9-29 09:48 |只看该作者
pbs:骨髓液=1:2        骨髓稀释液:FICOLL=3:1
: J7 W* j/ a  ~2 x7 L$ u
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发表于 2011-9-29 09:49 |只看该作者
不好意思,骨髓稀释液:FICOLL=2:18 J! }! P, N3 p. y  l

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发表于 2012-7-29 21:21 |只看该作者
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- t0 J: \4 W7 V" r6 {  s
2 \4 z& i. C7 D3 }1 W+ Y1 g6 v请问您用的FICOLL多少密度的
' j3 Y! g/ F3 ?8 N7 R; L4 P. U, R
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