关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

最近想做人骨髓间充质干细胞，上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC，具体分离液是FYCOLL和PERCOLL，想请有经验的战友推荐下哪个分离液好，并烦请写一下具体的操作程序。谢谢！！！

人在日本

用什么梯度分离啊，直接打到七号钟头里过一遍就行了，又快又省事

wangweilie0418

观察骨髓血有无凝血% T6 x" R. W4 P" j
↓
( V  u' S) B1 p" p" pPBS补加至毎管45ml（毎管血量尽量均匀），1800转∕分钟，10分钟。
2 j$ J. {# @% S2 z2 P↓
6 G  C; ~6 N: e, s- Q& C$ [弃上清，将沉淀用PBS重悬，毎管补加PBS后共30ml。
' s- E8 s4 Y1 U' R- W7 ~取已分装好的Ficoll（15ml∕管）将上述重悬液缓缓加于Ficoll上
% O2 w+ A- h9 s, m8 |2500转∕分钟，20分钟5 ^+ ?$ y! V. J- O2 p
↓
3 d: c- X4 |+ V( h3 [$ P) ]+ \吸取白膜层，补加PBS至45ml，1500转∕分钟，8分钟。7 S- E, ?8 `% T# J# a
↓/ }! o$ @" S- r6 |$ ]3 D) g
取沉淀，加PBS至45ml，1200转∕分钟，3分钟。5 |7 g* L6 [) G( A* B" g
↓6 V- l/ F% J9 {9 ]& \
重悬，培养。
9 e- w. o; [6 W1 C' Q" `

sunjianhua2000

pbs与骨髓稀释比例是多少，骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少？

琛儿326

回复 sunjianhua2000 的帖子
7 k: d. m2 ?0 \) o# F1 |- A$ n6 j& [: o3 Q1 k( h% o+ s
我们实验室用以下比例6 z  U; _" d: }
pbs：骨髓液=1:3，2 J& B5 U1 L; w
骨髓稀释液：FICOLL=2:1
5 ^% ]; k$ B8 c( Q! S

wangweilie0418

pbs：骨髓液=1:2        骨髓稀释液：FICOLL=3:1
6 H' `0 ^+ D4 F- Y

wangweilie0418

不好意思，骨髓稀释液：FICOLL=2:1
  B: n% B2 b- \  D% W* O1 J

wcforever126

回复 wangweilie0418 的帖子: E2 ~3 [- A# s) U

* T" y2 N. w: M请问您用的FICOLL多少密度的+ Y0 [! e8 x* c$ q- V. H8 c