关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

最近想做人骨髓间充质干细胞，上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC，具体分离液是FYCOLL和PERCOLL，想请有经验的战友推荐下哪个分离液好，并烦请写一下具体的操作程序。谢谢！！！

人在日本

用什么梯度分离啊，直接打到七号钟头里过一遍就行了，又快又省事

wangweilie0418

观察骨髓血有无凝血
0 ~/ l( y: S* `% r1 L↓
- Y) f6 q7 K! w1 w4 s4 n7 y  ~1 j7 fPBS补加至毎管45ml（毎管血量尽量均匀），1800转∕分钟，10分钟。& H, ?, r7 A* t8 s
↓! p6 k# X% z, x: r; ?
弃上清，将沉淀用PBS重悬，毎管补加PBS后共30ml。# `; W; a, v7 p$ \( {6 v6 c
取已分装好的Ficoll（15ml∕管）将上述重悬液缓缓加于Ficoll上* x9 _; N8 G  n- g
2500转∕分钟，20分钟% s& ?. o/ U! x2 M6 K
↓  _9 g1 D5 \1 d  H9 T- ?
吸取白膜层，补加PBS至45ml，1500转∕分钟，8分钟。
, v* b( W( b& t1 ]↓
0 b# q1 @- a- ?: G9 k# j/ z. T8 w% F取沉淀，加PBS至45ml，1200转∕分钟，3分钟。
" y% V4 B' b+ a' S3 C( A5 t, N↓1 F/ _. {4 \' z( R; A- g
重悬，培养。
, Z1 |" H3 ~6 L3 p# I, y; _+ i7 ?- U

sunjianhua2000

pbs与骨髓稀释比例是多少，骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少？

琛儿326

回复 sunjianhua2000 的帖子+ N4 Y% m$ z6 ?! `
* l+ S: t& n( F, s) l" B4 \" J" w
我们实验室用以下比例" b( H- r9 c$ Z5 W" ?' q
pbs：骨髓液=1:3，0 \8 z0 t7 ^" i5 h+ s1 J% [
骨髓稀释液：FICOLL=2:1
4 n* b6 ~( \! ]. w* x

wangweilie0418

pbs：骨髓液=1:2        骨髓稀释液：FICOLL=3:14 ?3 L% o# W) \" Y5 j

wangweilie0418

不好意思，骨髓稀释液：FICOLL=2:10 {9 i# W8 B6 \

wcforever126

回复 wangweilie0418 的帖子2 @, A# ?# ~- t- Y# F

% G6 t5 H7 q, E+ J0 a/ M请问您用的FICOLL多少密度的# l8 N) a$ S' `+ Z