小鼠脂肪干细胞纯度问题~

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1、原代分离出贴壁细胞的种类，与你的培养体系和分离体系有着重要的关系，曾经尝试过ES培养基培养，杂细胞疯长最终淹没干细胞，分离程序不完善，也会引入各种和更多的杂细胞。目前常规的培养体系中，原代贴壁细胞主要有内皮细胞（来自于血管，原代剔除血管和后期传代操作可去之）、造血干细胞（来自于血液，调整首次换液时间可去之）、脂肪细胞（洗涤不充分或洗涤方法错误引入，充分洗涤，洗液从表面吸弃，三次洗涤可去之）等；随着代数的增加，纯度是否有改变得看你的传代方法了，前三代传代最重要，得利用杂细胞与干细胞消化所需的时间上的差异来逐代纯化，三代以后纯度就相当高了。2 B1 J' g9 q& |8 T9 u8 W
2、是否必须过流式，你发文章时编辑可能会问你，若你没做可能不好解释；用于临床最好还是严格点，因为对于种子细胞的必须得有清晰的背景，而且用于临床的细胞，对其纯度要求是非常高的，这里的纯度不仅只种子细胞的纯度，还有诱导后目的细胞的纯度，没诱导成功的干细胞与诱导后的细胞混杂注入治疗，很可能致瘤，这也是ES细胞用于临床治疗的瓶颈所在，不过最近报道的PHA纯化可以很好的减弱这种影响。% j8 ~  T, n  u) _
  对于你说的“如果只是为了向别的细胞分化来鉴定其多能性，本人认为不过流式也可以”，个人认为不合理，原代分离的脂肪干细胞中有很多的杂细胞，也可能有造血干细胞，你没有用流式鉴定细胞纯度，没有剔除杂细胞的影响，诱导后的细胞你能说一定就是由脂肪干细胞诱导而来的么？这就造成了一定的不严谨性。7 N/ v/ }2 Z# ?' j* ]! P7 _
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3、脂肪干细胞没有特定的Marker，一直是其鉴定的掣肘，所以目前的同一的鉴定方法是三个方面相互辅佐共鉴之，我想你也应该看到过相关的资料：即贴壁生长、强自我更新能力，间充质来源干细胞Maker高阳性表达，三系分化，这是目前算是最严谨的鉴定方法了。
% t2 @4 q" C6 \; O   个人拙见，希望对你有帮助……
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