求助：如何使悬浮培养的EB贴壁？

yuyan

我们把想让获得的小鼠EB贴壁分化培养，/ U. {7 d, s8 |# J
按照文献中的信息，用0.1%的明胶处理过细胞培养皿之后，将EB放入此培养皿中过夜培养。0 X8 `9 I2 H/ Y! w5 y: z% I. m% w
第二天观察，贴壁很少，10%左右。另EB消化成单细胞之后，贴壁的效率也很低，还是有很多悬浮的细胞。* U9 Z3 g6 M* n; P+ {4 t

  C7 ~6 D# |: F请问各位，! Z& [3 H" S5 P8 ~" }9 u+ U
有什么方法可以使EB贴壁效率高一些？' ~' {8 Y  H. I1 v. W2 b' b
谢谢！

梦想lab

为什么要使EB贴壁呢？

splinkerette

我们的没有问题，EB挺好贴壁的。虽然用的是0.2%的gelatin，但感觉这个应该影响不大的

梦想lab

对了，你的EB指的什么？拟胚体么？

yuyan

回复 梦想lab 的帖子, S1 z, l2 t, `% [
( Z) R) Q# M, u, y1 _& Q. W) a
是的，拟胚体。是想让EB贴壁后，再加诱导液分化。

yuyan

回复 splinkerette 的帖子* C0 `* A. n4 P7 s$ f7 {- \
0 z8 {( {5 K! S1 [& C7 r+ s
我也试了0.5%的明胶，还是不行。" ]0 w9 F" Q% l6 s7 @
也许因为EB状态不好，会影响贴壁效果。

牙牙丫丫123

用0.1%的明胶铺基质，然后培养液换成KO的，你试一下
  M+ P) D, r) X; ]

yuyan

回复 牙牙丫丫123 的帖子
* x1 M$ Q* _6 ^
1 m. H5 w" a% {1 t: H* E: ^3 k谢谢啦，我试试看！

zpzp0312

看了楼上的回复，感觉这不是培养基质的问题! ?3 j; K; V; ~* \8 w7 c) T# B3 Z
应该是EB自身的问题
' Z: F& Z6 \1 K& h& j7 l7 m楼主的EB是不是结构松散，表面不光滑，有死细胞附着？如果是这样就要优化EB制备方法了
- M6 A, Y) P6 f4 U0 A7 a8 e6 Z. N  @建议发个EB的图片

fespysok

如果拟胚体经悬滴悬浮的时间过长，内部已经出现空腔，那样也就不容易贴壁了。