求助：如何使悬浮培养的EB贴壁？

yuyan

我们把想让获得的小鼠EB贴壁分化培养，
+ y' F+ D9 ^# h8 S) e4 F# u% q9 o按照文献中的信息，用0.1%的明胶处理过细胞培养皿之后，将EB放入此培养皿中过夜培养。
: g" L$ }9 \( m' x: V, x) X. }, ~0 L第二天观察，贴壁很少，10%左右。另EB消化成单细胞之后，贴壁的效率也很低，还是有很多悬浮的细胞。
$ g+ C+ E" Z0 Z" Z8 J5 |: M" c" [0 N  t
请问各位，
; Z, n% i0 V% Y7 L有什么方法可以使EB贴壁效率高一些？% U) I! C* \5 ?) x& R( g
谢谢！

梦想lab

为什么要使EB贴壁呢？

splinkerette

我们的没有问题，EB挺好贴壁的。虽然用的是0.2%的gelatin，但感觉这个应该影响不大的

梦想lab

对了，你的EB指的什么？拟胚体么？

yuyan

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1 ~7 S# k6 w2 w5 k. S2 b# m# K# m/ b- s! {% b
是的，拟胚体。是想让EB贴壁后，再加诱导液分化。

yuyan

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5 |! ^& `+ F; e' @2 i# q0 l9 I7 p: V
我也试了0.5%的明胶，还是不行。
3 V/ g, n* `& a6 q* m# j* Z也许因为EB状态不好，会影响贴壁效果。

牙牙丫丫123

用0.1%的明胶铺基质，然后培养液换成KO的，你试一下
; m1 I) g$ F2 u% r4 N( c5 Y& }

yuyan

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' l. s$ j# D% S8 w$ L& W. F. Z" x* p
谢谢啦，我试试看！

zpzp0312

看了楼上的回复，感觉这不是培养基质的问题
) J2 A  F6 x7 s1 W1 p* j应该是EB自身的问题
2 \& ]1 }) }) k: B! }; g" e9 D楼主的EB是不是结构松散，表面不光滑，有死细胞附着？如果是这样就要优化EB制备方法了
" V+ U7 b3 V: K% V建议发个EB的图片

fespysok

如果拟胚体经悬滴悬浮的时间过长，内部已经出现空腔，那样也就不容易贴壁了。