透明质酸酶怎么配？

随心

我想配置0.5%透明质酸酶，用PBS，来去掉兔卵母细胞的卵丘9 _' ]- `. `- Y, `9 Y
1，配置时为什么透明质酸酶要自溶，为什么会起气泡呢？
) L  i! B  p2 B: D( q2，自溶时要放在4℃吗？室温为什么不行呢？$ \( [8 J  h" _" I' _' O" R
3，pbs中要不要加一些葡萄糖等营养物质，估计要消化几分钟，消化时间这么长会不会使卵母细胞萎缩什么的影响体外受精呀？  \: j6 K8 t: _' V- c7 t, q
急需高手解答，万分感谢，回答加威望。

随心

另外：0.5%透明质酸酶是指100ml里0.5g还是0.5mgHY?

tangyvhuang

0.5mg加到100ml里面。没记得有什么泡沫的，室温就可以的。没有消化过这种细胞，不知道多长时间合适，透明质酸酶是减低细胞间质的粘性的提高通透性，我估计不会造成损失。说不好

xiaomingxu

楼上说错了，0.5%是指质量体积比，即0.5g HY 加入100 ml胚胎操作液中。
% e/ Z# t+ l) S2 {6 e' u标准配置：是要用胚胎体外操作液（人上就是用G-MOPS+5% HSA）4度过夜溶解hy粉剂，目的是避免影响酶的活性。不能用PBS，楼主担心是对的。

tangyvhuang

xiaomingxu 发表于 2011-10-14 08:25
$ {3 v; |" n6 `/ f; T' k+ Q. Q楼上说错了，0.5%是指质量体积比，即0.5g HY 加入100 ml胚胎操作液中。6 {- F5 s6 I; y* e* \! ]5 p/ x
标准配置：是要用胚胎体外操作液（ ...

' ?7 f5 E. R, }) M是0.5g对应100ml。我说错了

随心

回复 xiaomingxu 的帖子2 P' o" o' l, K

0 J. c- ?2 V2 g# U, z6 {) W# e透明质酸酶放入体外操作液，过不了多久就全融了，为什么一定要过夜？透明质酸酶不好溶解吗？