求神经干细胞培养方法，急！

safflower

各位高手，请教神经干细胞培养方法，急！

caiwwcom

回复 safflower 的帖子2 Y6 E- e# Q5 e! m( a5 z! Q3 b5 w2 i

5 s7 ], Y/ ~: c2 ~5 ^) F8 Z' `- G4 i% p哦 学习了  谢谢啊

safflower

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2 j. O; a0 ]5 |$ J4 q5 d  ^
( S; d% T7 R' l( K# n% L3 ^( A选择800转也可以呀

caiwwcom

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) s. v$ B6 S6 V0 V( r7 ^3 e9 d) n$ E6 p) g
平时就是用那个小离心机1000转大概100G左右，这时候死细胞也离心不下来吗 谢谢

safflower

回复 caiwwcom 的帖子+ b  t- i$ o( B+ `" I/ B5 B- ]

* F( G; B, p& u* W" G2 P9 \' v离心的时候死细胞、细胞碎片在转速低的情况下离不下来。

caiwwcom

回复 safflower 的帖子4 R9 }3 r7 R) A: A" t0 ]

/ L, ]5 P0 E5 m1 j: _9 e# X你好  我新学  最后那一段说的直至去除死细胞及碎片什么的可以通过那种传代方式去除吗 死细胞什么的不也是悬浮吗  跟神经干细胞相似

safflower

一、培养基& M; C# i: c* c+ p) s
1.神经干细胞培养基（100ml）：98ml DMEM/F12, $ s. D. Q3 s) g9 n1 p8 T7 W) B
2ml B27 without vitamin A, / `" z; a/ L" f/ n2 f) p7 T
20ng/ml EGF,
! `7 s. b8 r- h, s" {. t: T  t20ng/ml FGF-basic3 D, \3 b: U/ ?2 G. M
2.神经干细胞分化培养基（100ml）：, C2 z+ [! V- v% m+ y
90ml DMEM/F12, 2 S! F( V4 s* ^; V
10ml胎牛血清。
5 o! G6 u$ }5 Q3 v二、神经干细胞的原代培养6 @. H' r6 k* T, @: E, f- n
将孕鼠（E12.5）脱颈处死后，置于75%酒精浸泡消毒。在无菌条件下剖腹取胎鼠，在体视显微镜下取脑，仔细剥离脑膜和血管，分离出大脑皮质。用显微外科剪将大脑组织剪碎，加入少量DMEM/F12培养基，用玻璃吸管反复吹吸多次，形成单细胞悬液，再经200目尼龙网滤过，1000 rpm，离心5 min，弃上清，加入神经干细胞培养基，用吸管吹打使细胞沉淀与培养液混匀，形成单细胞悬液。用台盼蓝染色后计数，调整细胞密度，以2-3×105个/ml接种于25cm2培养瓶中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养。& A( C  ]* T+ M
三、神经干细胞的传代培养' e. @: G1 h# Y0 s
原代神经干细胞培养7天后，即形成细胞球。将悬浮培养的神经球吸至离心管中，1000r/min，离心5 min，吸除培养液。加入适量神经干细胞培养基，用玻璃吸管反复吹吸多次，形成单细胞悬液。将细胞均按2-3×105个/ml接种于25cm2培养瓶中，置于37℃，5%CO2培养箱中继续培养。以后每7天以相同的方法传代一次，连续传代4次以上，直至除去所有死细胞、细胞碎片和不规则细胞团块，形成规则的神经干细胞球备用。( O2 Y# h! `: y) y

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