流式细胞术筛选后的细胞数量很少，怎么办？

daviddow

流式细胞术筛选后，离心1200rpm10分钟，细胞的数量很少，几乎看不到。不知道什么原因？怎么解决这个问题呢？谢谢

Tonypan

很少是多少？3 ~& u8 T) \8 O8 `% }7 L1 O5 }
有没有计数？: i8 p, l+ q$ f# o: b
分选前有多少细胞？你的目的细胞比例有多少？8 g" y) y4 o1 \; P1 j! l
算一下回收率
: x- O# B5 i, e/ R回收率=分选后细胞数/（分选前细胞总数*所占比例）
8 p' E* j" F7 c' I4 x5 {- Q回收率低的话可以适当降低流式的分选速度。7 h; A: G8 ^! [& p! M+ _: m, Z
0 Q: ~: r5 e8 |
很多情况下分选所得到的细胞数量少是很正常的。

Tonypan

另外，表述离心的时候尽量不要用rpm，如果用rpm就要给出你离心机的半径。不同半径离心机同样转速离心力差距是很大的。
$ }! T- U! H, b% y, Z; k300g×10min离心，PBMC或肿瘤细胞都没问题。

yangqiurui

曾有人说，不要用胰酶处理待分选的细胞。因为胰酶可能消化掉膜表面标志物。

meister

分选数量少，需要有个标准。主要需要考虑的是回收率， 而不是数量。 因为某些细胞本身比例就低。如果分选回收率低， 则需要调整分选参数

daviddow

谢谢大家的回复。
# M  x- r# n7 m$ u# V  g: Y我分选的显示回收到10^6个细胞。可是离心下来后，就是用流式细胞管离心，1200rpm10分钟，在管底没有看到细胞。不知道大家是不是遇到过这种问题？

8231946

可以再离心一下，如果还不行的话只能下次做的时候加大细胞量，损失是肯定会有的。

dandan9230

有时候是看不见的，其实有的。不要用胰酶哦

evial

首先10的6次方已经很多啦！这个看仪器计数，是富集还是纯化？我能收到的细胞是千分之一，只有几十几百到几千个。不要放太多FBS，2%已经可以了，或者不放。还有可能性是液滴漂掉了，接受时有问题。

Tonypan

对胰酶敏感的细胞marker肯定不能用胰酶消化啦0 h' U3 q7 E. F0 m
10E6细胞在流式管里看不到也算正常，有时候在流式管的管底有“雾雾”的一层，对着光仔细看能看到。
/ M1 S$ a" m; R10E6在1.5mlEP管里应该看你看到