神经干传代后细胞活率和增殖速度

coffee.cat105

         今天给神经干传代，只吹打，没加胰酶。顺便计了一下活率有70%不到，不知道大家用的是什么方法，传代后活率是多少？增殖速度又是多少，我这个长得各种慢啊，估计长出来的，一吹又死完了，我都不敢再计数了，5555

jj2570782

我的也是这样的情况啊 每次传代后长的很慢，状态很差！ 求高人过来解答一下吧

jj2570782

我的也是这样的情况啊 每次传代后长的很慢，状态很差！ 求高人过来解答一下吧

angelyannan

看文献中有的通过计算神经球的个数来分析神经干细胞增殖能力或者说自我更新能力的。就是一般以一定的细胞数接种在96孔板中悬浮培养，大概7days后计数神经球的个数。
3 l" k* G$ J  }, Q有以下疑问：7 S) ]. S% ~' r( s) j
1.如何确保每孔接种的细胞量误差最小？因为是低密度接种，个人分析以普通细胞计数板计数不能很好的满足精确性要求。7 `1 J1 c: |( C  F" L
2.不同代数的神经球个数相差较大，比如第二代相同条件下可能是第一代神经球个数的2倍还多，这样要想实验条件稳定的话就只能使用其中某一代的神经球进行检测，加长了实验的周期。
( b. O$ a# ]8 t; D3.不同批次相同代数的神经球数量也会有所差异，当神经球数量较少的情况下是不是说明这批细胞的状态不好呢？8 d* w# I4 l! }: S& H" |: r- x
以上问题在文献中实在是难以找到答案，故请教大家加帮忙分析分析。不胜感激！

angelyannan

决定上传一次比较好的实验图片来吸引一下大家的眼球~

get0715

检测神经干细胞的自我更新能力，用有限稀释法，将神经干细胞吹打成单细胞悬液，计数，算出细胞悬液的密度，取半量细胞悬液稀释2倍，以此类推，一直稀释，至每毫升5个细胞，即每200uL 1个细胞，接种至96孔板，当然理论值是每空一个细胞，但实际上一定有不止一个细胞的孔或没有细胞的孔，接种后找到只存在单细胞的那个孔，培养，观察，如果形成克隆球，那么就说明神经细胞具有自我更新能力。这个工作量很大，稀释还简单一些，只是找单细胞孔的时候需要很长时间。

changbo529

5 j9 l* n4 `% T- b  ^* ~" ~7 A
; \8 _" k- v* t: q神经干细胞培养及活力测定及增殖指标有哪些？

jennyshy

http://www.stemcell8.cn/thread-18063-1-1.html
/ P( G" x  ]/ U, B% K# T5 v& }- c7 E1 C) {3 N( W
我之前发过传达不错的步骤，可以参考，NSCs比较难伺候，多花点耐心和时间吧

changbo529

即然计数是个难题，查看一些文献，为证明神经干细胞增殖情况，能不能单用MTT法检测细胞增殖能力并绘制长曲线，或应用5-BRDU渗入法观察细胞增殖呢？

coffee.cat105

我的细胞增殖速度3代以后明显慢了下来，这是为什么啊…………基本就不长，我现在就纠结，有没有可能其实它是已经分化得差不多了，成了前体细胞了呢？