请教下关于老鼠ES细胞培养

牙牙丫丫123

看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养层上都有一些淡淡地紫色

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我不太清楚你用的是哪个公司的试剂盒，有一些试剂盒是需要过夜染色的。7 n9 ~2 P; Z" N1 {3 }
传代时是否消化成单个细胞这一说法有很多人都不一致，这主要看你们一直用什么方法培养，说消化成单个细胞是因为mES可以支持消化成单细胞的传代方法。# }5 [/ |. [# u: O0 B
Feeder的密度不要太大，太大了不利于ES的生长。; [& ~' Y/ \/ G) }3 q+ c& [, e
而且ES传代时机要把握好，不要等ES长的太大了在传代，这样容易引起分化。2 w6 g) Z6 w! U7 d" e) `9 ~* b4 f
AP染色的原理是：细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH9.0－9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠产生α萘酚，后者与一种稳定的偶氮盐偶联染液，沉着与细胞浆中。
) |, H& \6 N& b& K  A3 ?3 n0 F染色的时候着色细胞集中在一边有两种可能性：1、这些细胞没有洗干净2、克隆中仅有一部分细胞分化了，其余的细胞还没有分化，所以呈AP阳性