请教下关于老鼠ES细胞培养

iamxuchen

- |, [) T3 O4 t: Y7 Y这是培养的ES细胞一传二后的第二天的照片，感觉比较小; S% G) h9 e9 @' b/ Q' X
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这是第三天的ap染色情况，因为第一次做这个不是很有经验，想问下这个情况是大部分都分化了吗？
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这是另外一瓶的情况染色明显比前面那瓶深，但形态也不是很好，这跟染色有关系还是细胞本身的问题？

zhusealin

mES传代的时候要消化成单个细胞，不然就会分化

牙牙丫丫123

看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养层上都有一些淡淡地紫色

iamxuchen

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牙牙丫丫123 发表于 2011-10-23 15:21
7 M8 u+ k+ E; A: ^/ }看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养 ...

+ d# E( i3 m& p4 d/ k! L7 p2 T' b
& J# s; {6 \% I" c8 b, d0 `谢谢，这又是一张照相机拍下来的第一张AP染色那瓶的细胞，染上色的不多，感觉分化了基本，主要还是要把细胞传代时吹成单个哦？mef的密度有什么要求不？长的太满会不会影响啊，AP在干细胞染色的原理是什么啊？为什么会出现一个细胞染色集中在一边？谢谢~偶比较新手

牙牙丫丫123

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) S# H3 D# b- m) F! m; |. w; y2 K& X9 D2 Q3 c; M' S
我不太清楚你用的是哪个公司的试剂盒，有一些试剂盒是需要过夜染色的。/ C' \. {6 [. K" `; K5 w
传代时是否消化成单个细胞这一说法有很多人都不一致，这主要看你们一直用什么方法培养，说消化成单个细胞是因为mES可以支持消化成单细胞的传代方法。
& R0 J- r% B% O! MFeeder的密度不要太大，太大了不利于ES的生长。
3 [' a+ C% E8 r' b5 `而且ES传代时机要把握好，不要等ES长的太大了在传代，这样容易引起分化。
1 @: J! Z/ `( Z' J& X- t1 H3 cAP染色的原理是：细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH9.0－9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠产生α萘酚，后者与一种稳定的偶氮盐偶联染液，沉着与细胞浆中。
' [/ B% \5 n+ @) f# g染色的时候着色细胞集中在一边有两种可能性：1、这些细胞没有洗干净2、克隆中仅有一部分细胞分化了，其余的细胞还没有分化，所以呈AP阳性

subenjinwo

朋友，请问这是什么细胞？

iamxuchen

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谢谢！学习到了

llecstem

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# F; F/ E) A& A0 ?/ f% t你好，请教一下，mES细胞的单克隆生长的很立体，边缘也很清晰，是不是应该就是没有分化？边缘出现了泡状的细胞同时扁平了就是分化了吧？谢谢！