我的间充质干细胞不长！

zhuzhoujie24

用的是DMEM高糖培养基，血清用的是四季青。细胞原代获取的数量还可以，但是就是在培养基里不怎么长，都1个多礼拜了！就是没见长，也没有污染！请问这是什么问题啊。对了，我没有纯化i细胞，孔板里还有很多巨噬细胞和造血干细胞...

zhuzhoujie24

回复 sailree 的帖子9 b0 u. _- d$ w  @! M! ^

& o/ e8 a4 ?' z0 _它老是不长，所以都没办法消化啊，是不是有杂细胞的原因？

hnsdlgl

zhuzhoujie24 发表于 2011-10-28 13:52
2 J. c, g) W/ e用的是DMEM高糖培养基，血清用的是四季青。细胞原代获取的数量还可以，但是就是在培养基里不怎么长，都1个多 ...

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针对你说的现象，我还有一个疑问：你对这瓶不长的细胞有没有做过支原体分析？
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我们培养细胞的过程中，通常鉴定有没有污染，也就是简单的看培养液有没有变浑浊和显微镜下看有没有菌丝等。但这两种方法都没有办法分析支原体，即使是通过0.22微米的过滤器过滤培养液，也没办法除去支原体，就我个人而言，通常如果我怀疑某瓶细胞有支原体污染，也就得将这瓶细胞处理掉，从头再来。

hnsdlgl

四季青的血清培养原代细胞运气好也长得出来，但是，如果要做传代培养的话，原代开始请不要用四季青的血清。因为我开始也老出现这样的情况，后面改用Gibico血清后，这个问题也就解决了。需要特别说明的是，我那次是托朋友买的1900元/500ml，其实比你的四季青也就差不多两倍的价格。培养基我用的是国产低糖DMEM。
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5 d) \. Y+ c( n8 I# Y0 A! R当然，用低糖培养基还是高糖培养基，通常要根据你养的MSC源是什么而定，比如小鼠和人的MSC，通常用低糖。

天枰2012

干细胞是不是低糖的培养基更适合些

流浪的猫117

关于血清及培养基的问题真是众说纷纭永无止境啊。。( P7 m4 ?# p! k" _. e4 {0 I
我用过DMEM/F12及高糖DMEM的，感觉DMEM/F12长得更快更好，高糖我们加了7-8%的胎牛，长也能长，但效果较差。
& H* o0 N7 W8 e5 |现在在试低糖DMEM。
) t6 w  A0 b7 L' K/ C! B' N; x* _另外看很多国外文献用的是α-MEM的，对这个培养液不甚了解，有了解的能介绍下吗？

wangzhiqi86

肯定是血清问题，MSC最好用FBS，NBS生长肯定不好啊

水兰色

很可能是试剂问题，最近国内试剂假的太多太多了害人不浅

meister

首先是血清问题， 进口血清推荐。8 v' [7 k* k, n& C- T5 J3 B
另外高糖DMEM不是很适合。

sailree

可以用DMEM-F1210% 加血清胎牛血清 （四季青的也可以用）或者使用GIBco的无血清培养基或者是lonza的无血清培养基（加基质）后者贵点，如果不用于临床的话可以用前面的方法。你说的还有其他杂细胞，那要考虑在组织处理过程中是否将血块，血管剔除了或少量残留，还要考虑是否有支原体和细菌可以用高倍显微镜看一下。这些都可能导致细胞生长缓慢，还有就是我也做到过有些组织分离出来的细胞是有可能长不好的。弱弱的问一下是楼主是用酶消化法还是组织块法？