胶质瘤干细胞的筛选方案选择

黑之后觉醒

各位大虾，小弟在做胶质瘤干细胞相关实验设计，看了一些文献，现在肿瘤干细胞的筛选好像集中于免疫磁珠 和 流式细胞仪法，各有什么优缺点？就经济和时间效率而言，哪个更适合我做呢，我是神经外科小硕  初涉实验 谢谢

evial

磁珠更烧钱而且每次只能上一个标记，多标记的花花时间，但是细胞损伤小分选后存活率高一点。大流式相对便宜一点但仍然是市面昂贵的技术，可以多标记分选速度快，分选后细胞有点小小损伤需要恢复。

黑之后觉醒

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( Y1 ]* l# L8 C2 s; b8 p' n想请教您，神经外科小硕 准备做实验，没有多少钱 经验也不足，建议 筛选 用什么方法？谢谢

evial

没有钱怎么做研究？钱少做不了好的研究，干细胞研究都是烧钱的，看你有多少预算了？
, K. U4 |8 ~3 t% Z市价大流式做一次3000-4000吧，买一个抗体3000左右，看你要几个抗体做多少次了。一桶鞘液1000元能用3天也就是3-4次分选。分到够得细胞还有后续研究，干细胞培养基也很贵，stem cell的3000左右一瓶，还有特定生长因子也是好几千一个。磁珠的抗体要比免疫荧光贵至少1/3.
( d. y# z1 _5 Z. {. e$ k, h& j具体你要做什么我不知道，去问导师方向并讨钱，嘿嘿

黑之后觉醒

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; j' J7 C; F# z7 Q% ^  b) }: v
- e+ G7 ^* Z9 @9 S% S恩，谢谢。老板给了我6w,我是怕不够，之前我也了解了一些情况，流式好像节省时间，很快就能出来，免疫磁珠好像有些麻烦，而且时间跨度大，是这样么？小弟准备以胶干为靶，相关试剂处理后，测自噬有关的 PI3K-AKT-mtor信号通路上的异常信号表达，实验目前还在设计中。请您不吝赐教。

evial

这是很常规的思路，CD133标记就成了，以前没有人这样做么？有文献么？
" u+ b8 g; \2 a( b- f' w! q1 y6w够你筛选吧，整套下来起码10万。用的是细胞系还是临床标本？
& H8 x5 J: n* n0 D5 t" R你在哪个城市用什么仪器？

黑之后觉醒

回复 evial 的帖子3 Z  ?* r" n) J+ Q! s# L8 D: |
  I, t& T* e* Q
我在合肥安徽医科大学第一附属医院神经外科的，实验在中科大生命科学院做，CD133标记后再用流式筛选？标本是临床胶质母细胞瘤培养出的干细胞，镜下神经球已经形成，现在在斟酌筛选方案，免疫磁珠？大流氏？免疫磁珠贵了点，流式对细胞好像有损伤，还得修复。所以很犹豫。您说的仪器指的是什么？大流氏？

evial

临床培养出的干细胞？你的设计方案有问题，选什么你们看着办咯，都是可以的方法。

黑之后觉醒

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4 P( u% B1 n) C* {& H; q/ \0 j# e7 u0 x6 g3 O$ W, j
怎么有问题呢？临床标本室可以培养出胶质瘤干细胞的啊？向您请教。。。。

evial

培养过后细胞在体外环境生存表型会改变，离体后不是体内环境当然不能代表体内情况，建议离体后24小时内做后续试验。