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[请教] 小RNA的反转录疑问 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-11-6 16:30 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本人偶得一份小RNA的反转录的protocol:
- r3 |' M3 \+ z% }8 ?反应体系20uml,' u+ ^, x8 P! G. J
反应条件
2 _6 @) Z2 B1 ^% W前面的加颈环温度为65℃/5min,0℃/2min- o/ _! `& I( V9 T- D
逆转录为:
: ?5 F% s9 f8 O  Y7 ]" o16℃,30min* }9 w) Q3 r7 d" b
30℃,30s& R* r) U. s/ S' h$ O
42℃,30s* T& s- @+ Y2 P# d# J6 x
50℃,1s
2 V3 E" z. f% d" ~) V70℃,10-15min% T! J6 L5 Z% v$ M3 j1 r8 h* G% \5 M! B
0℃,pause,30/42/50s60个循环。就是不知道这些步骤的代表意思,哪步是孵育哪部是变性失活呢,谢谢指点
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沙发
发表于 2011-11-6 18:27 |只看该作者
我觉得这个猜起来有些难,毕竟小RNA的反转录和其他的RNA反转录过程是不一样的!最好有更详细的信息,比如用的什么酶?$ ^3 B) [5 e* y/ R
所以,最好有更详细的信息提供!
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藤椅
发表于 2011-11-6 18:35 |只看该作者
反转录过程的条件是根据反转录酶来设置的,不同公司生产的反转录酶也有差别的。做的时候要根据自己买的试剂说明来。
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