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[请教] 干细胞分选效率低,提的RNA浓度过低,什么原因??? [复制链接]

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发表于 2011-11-7 09:33 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
        我们用的是天津澋洋生物的小鼠淋巴分离液,美天旎的lin-和CD117免疫磁珠。先用淋巴分离液分选单个核细胞,再过lin-和CD117磁珠分选。分选后的细胞量还是很大的,8只8w龄的小鼠可以得到7×10的6次方个细胞,但是镜下观察有很多红细胞,培养一天,第二天看时竟有很多梭形的贴壁细胞。但即使这样,细胞量还是可以的,种六孔板,每孔有2×10的6次方个细胞,TRIzol提RNA,过程中也能看到RNA沉淀,但测RNA浓度却是很低,无法继续后面的实验,纯度还可以。我觉得主要问题还在淋巴分离的那步,我们是2000转离心20分钟,之前试过1500转15分,1500转20分,但白膜层还不是很漂亮。这实验中应该问题很多,我们也总结了一下,请大家给看看,指点一下。谢谢!
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