我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

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% {8 a4 l6 H& |3 }; g; F4 |这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？# x/ [1 x0 q5 ]+ b( _
我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

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7 }$ L3 B3 V# @" ]# z& C) \
0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

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+ q3 ^9 J; j. a  o! l- O, Y) s
+ [) E# `9 t/ K+ A# Q9 |哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

回复 Tonypan 的帖子0 A% j$ T  A* h. S

  D5 S, j+ n/ v' d如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

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# g: B: O6 o$ d% h2 _4 ^1 [
  c2 A- X, A5 z0 g1 f9 R5 F( n谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

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* j4 e  d, C" y7 ~% F+ T不知道你们有没有用磁珠做分选的？8 @7 K* v) R3 K  j7 O& k2 W4 \
贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。
: u! V/ T9 }: Y$ `9 v+ T" E$ T骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁
% F+ s) M1 D: U; Y; ~" `4 G可以试试这个方法。
- ^2 b( e! g+ s0 B7 `5 @能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate5 j6 S# h4 e: i% T  o
Autoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells
4 B, i4 {; o+ a0 t( p6 [! Gcell stemcell 上的文献