我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

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1 @$ Y$ v/ U  P, F9 y这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？
$ K. [5 T2 V" y  P3 T& W" P% R" J我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

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# P  N5 ]% P+ a) J0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

回复 wangzhiqi86 的帖子( H& ^3 q! c  T5 n2 r
% f& T, [/ o7 h0 D( G! C- D# ]" C
哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

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' V# m" ~) }5 K! ^" |9 |7 j: q如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

回复 wangfw 的帖子7 K% b* B4 J9 ^: H1 m4 A
" O. }/ o# B1 D. m3 f5 W- s) `0 i" d
谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

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不知道你们有没有用磁珠做分选的？4 G" h* q6 z7 [) C
贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。6 p; [+ {* x4 E5 K
骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁
6 J3 c0 d% p' }1 y1 O- U可以试试这个方法。
% `  @1 I/ ]8 z! U能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate
1 o/ k; l$ J( E! QAutoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells
% j! P# B/ o! u6 Vcell stemcell 上的文献