我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

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% B' a+ v6 S+ {. p8 M& W这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？+ _/ c, L, \: s7 t% j& A
我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

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0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

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( v2 T6 O7 k) ^5 x1 J2 [; F$ c  @% c哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

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6 a/ q; t! P9 M如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

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谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

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+ {) G! l7 y9 [+ H4 W2 V
" C: Y, M# j' d不知道你们有没有用磁珠做分选的？# |- y' X5 P" e7 n. B% M- ^
贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。
  o( G+ D& n' p- M骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁$ F' W* Y' J/ j4 e
可以试试这个方法。" s$ g8 \! e& Z  k  z. M
能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate
3 H( ~2 ]0 F6 y  y( ~, ^Autoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells
* ^4 Q5 L- A/ w3 e1 [3 s8 ncell stemcell 上的文献