我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

( r6 S# C" q( ~  P* @. I) t: C: L4 g
这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？
7 M+ n3 D+ J/ O' E. [我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

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) ^+ u* S2 G  {$ A% a' U) a% f& B2 H% H7 S8 E+ G3 h
0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

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- t/ b! U' e5 S; I# q7 i' W! r  H: `8 H
哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

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; B2 y; H! p0 ~5 R$ R" |* c! J. B' t8 v
如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

回复 wangfw 的帖子) @' z3 L8 \. M& r/ ^% i
3 V- F, l8 b; v/ ~  \2 D
谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

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, \6 K! A0 s' ^+ t3 y& O9 @* p0 P4 L8 V' B
不知道你们有没有用磁珠做分选的？
5 B" t' n: v3 [1 D) R' B贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。
/ G) t% K8 K8 n7 u1 x% p8 M骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁
5 f8 `4 r' v, p" X! c可以试试这个方法。( z6 P) w# W) ]6 B3 C
能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate5 H; o* s: b5 ~
Autoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells
; }0 \7 ]+ k1 [  j+ h& _( S: Hcell stemcell 上的文献