我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

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& I! p. ], C& @. O. A5 [这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？1 a- l, R) U+ I/ @9 J
我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

回复 不苦的药 的帖子! r9 ^4 G  q) [7 M

7 I* d1 L0 L$ G7 J0 {# O0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

回复 wangzhiqi86 的帖子% b1 E' |# o- Y. ?  R

: O: h$ Z3 I" j% j4 G6 A哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

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1 w: V8 o: O; k( ?" B# ?如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

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( e6 r% M# ^0 f) @" _* M" }8 n3 i) E  G! @2 x. T5 O
谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

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不知道你们有没有用磁珠做分选的？
$ f4 o- `2 p1 p; l- C3 ~贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。: V0 c9 H- ~, \  E6 H# p& d$ A
骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁
, _5 f6 t( ^* w' F' h* s可以试试这个方法。: c# T5 r( @. M+ d1 Z; s) ]4 u8 a
能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate
# X7 c, |) r' X' NAutoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells5 Q3 m& n; W+ y+ L3 u
cell stemcell 上的文献