我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

wangzhiqi86

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! V% n9 g7 U1 w( D9 G细胞开始贴壁时，量较少，哪里有空间就往哪里长，等到汇合度达到70%以上的时候，由于培养瓶空间有限，它自然就呈梭状了

spchsq

考虑是巨噬细胞，培养2-3个小时就能贴的很牢，胰酶EDTA也不能消化，只能用刮才行了，但你要的是间充质，消化不下来就可以直接弃了，好消化的是间充质，传代之后应该就纯了

dyg108

从图片上看，培养基似乎有一些问题。注意是不是加了阻止分化的因子，如bFGF，维生素C等。, I  p2 M3 c/ J( D* x5 x
还有养的是那种动物的MSC，小鼠的原代需要的时间有点长，注意耐心等待；大鼠的时间相对较短；而人的要根据取骨髓或骨髓血的量来确定。第一次换液时间长些，以后最好换液不要超过两天，这样有利于保持干细胞的未分化状态。
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! c( n2 V. o$ G6 U, l纯化问题再原代是不用做太多考虑的，只要能见到MSC生长，当长成一定的集落时用消化法纯化就可以了。MSC很容易消化，原代由于细胞杂数量多，所以添加胰酶的量要多些25cm2的瓶至少加2ml胰酶，消化时间不宜过长，2 min 25-37 ℃即可。
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' K2 k' A! v2 ], t& T/ v但从你发的图片上说现在最主要的还是培养基问题，和原代获取方法的问题。

imgaga

回复 dyg108 的帖子. L. ^3 X4 w3 m# B: v

( K) k  Y8 Q, g" N4 F# |8 x( c我用的是GIBCO低糖DMEM培养基，10%四季青血清，还加了双抗。没有加细胞因子。SD大鼠，全骨髓贴壁法，5天首次换液，以后是隔天换液，细胞长的很慢，不知道是什么原因.

dyg108

回复 imgaga 的帖子1 D8 F  B3 n/ `2 `

6 D! s" F6 Y2 `/ p如果是这样的话那可能是血清的问题，建议用GIBCO的血清培养原代，如果真是资金有问题可以在传代后换用国产血清。# @. W0 ]6 [9 X  b# m# C1 b/ Y
但国产小牛血清对维持未分化状态效果不好。
2 Q$ q& m. w- J  N: `; k4 v4 X不加细胞因子也可以长起来的，并且长势还可以，只是有肥大老化的迹象。
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全骨髓法骨髓分离也是非常重要的，一是老鼠的选择（尽量选择年轻的老鼠或出生不久未睁眼的老鼠），二是要赶时间（从老鼠处死到取得骨髓的时间尽量缩短），三是取出股骨后不要用酒精浸泡，四是接种原代后前两天最好不要动也不要观察。

天枰2012

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

     我的细胞也有这种情况，请问具体怎么做啊？

hygene

我养的BMSCs刚开始的时候也有类似的球形细胞，不过传代后就会变少，3代左右基本没有看到了。猜测可能是红细胞或巨噬细胞之类的

stefan

个人觉得楼主可能第一步细胞分离时可能就没分离好细胞，建议Percoll分离细胞较好！

nihaohao

感觉圆形的颜色深的细胞像巨噬细胞，另外宽大扁平的细胞像老化的MSC

nihaohao

若想验证，可以流式细胞仪检测一下？（ 检测marker: CD11b 或 CD68）