求助 配制Dispase2

luckywen

      请教前辈如何配制Dispase2？用PBS稀释后有好多不溶物，不知用什么稀释液效果比较好？

susannajoke

这个说明书上写的很清楚
8 w: f  M- G6 c, p! g& VPreparation of Stock and Working Solution7 \) B- o% @  o5 O. ]
Dissolve the non-sterile lyophilized enzyme in Hepes-buffered saline (50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl) (10 mg/ml). Dilute further
, V3 ^: q- U. Z0 b! g# xwith the culture medium to be used for the isolated cells to a final concentration of 0.6 to 2.4 U/ml. Concentrations higher than 2.4 U/ml are
: L$ _! h& F- s' x5 {+ _5 w  q; inot recommended. Sterilize through a 0.22 m filter membrane.9 E8 I/ m* a* ~9 o" S0 N( l" y
0 h. Z' B3 I: }8 D2 Z6 @- p
溶解在Hepes-buffered saline （Hepes缓冲盐溶液：50 mM Hepes, 150 mM NaCl，用KOH调节 pH 7.4），储层液浓度10 mg/ml；
! H3 I+ K! ?% t1 j( L' h工作液用培养基稀释为0.6 - 2.4 U/ml （0.8 U/mg），用滤器过滤除菌

yangpan521

我们配置时用的是基本培养基（不含血清），然后0.22ul滤器过滤。

yinjiqingqq

使用基础培养基和PBS都可以，但要注意一下溶液的PH值。配置的酶溶液最好to stir gently for 10-20min. 以前我充分混匀溶液后，也有不溶物。但酶的效果也很好，个人觉得那可能是milk之类的东西。最好过滤分装，-20度保存。如果你不是长期使用，建议你一次不要配太多，因为一些酶配制后，不适于长期保存。