球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教6 J0 R& C& A, m5 Z' ^7 z- N
1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。2 I9 M4 `+ J, I! @
2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？
! I' |! M( y' F) f1 i- v) y; K3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。
" j* [, j3 |9 m. J9 P* a* e+ Z! Q+ p9 e# I" K& \/ |
谢谢！！！！！！

doundo

回复 bin 的帖子
( V' |0 i2 J5 f# ], ], {7 F* ?$ u1 [7 I# ]! `3 |" N# T
请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？! P5 P; }# |" ]( g& Y6 C

- @- h9 G: x1 v) @& X至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。
3 t) d: u5 g& @+ k/ m; s& A如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：
2 F* H! U7 @5 |生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。: v& K! ~+ N# f$ n) e

8 n* B. f* d& Z4 D5 _但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

回复 meister 的帖子2 z& @/ B! G, T" X! M# g0 ^

6 q+ j+ u: \9 J3 i/ d# J3 Z感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

doundo

回复 shen_coco 的帖子
! G+ d+ X7 V3 V3 ^2 {  H  `, i1 g+ m3 B: ?( R& t. \
感谢shen-coco
) v: l" o. c  k2 N% W6 K我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。3 |6 X: s- W3 o; A+ l" G" ^  W

( U& E2 h1 G# s. E' U, M我想请问下，; Z' [1 C3 r( r( [5 n" U  H9 U
为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？1 |  {4 ~$ R+ `- H
我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

doundo

有朋友问我qq 我没有权限发送消息，只好贴在此：19586420 欢迎交流

doundo

回复 shen_coco 的帖子
, I0 e/ H! R; u; Q" [- ]
! c8 L, y7 p6 J/ v1 b感谢您的解答。
! p- p5 a4 [, I2 {我有三株肿瘤系细胞株，加无血清培养，细胞增殖很快。
) E5 A7 B# e/ ^6 P9 u此外，从我样的原代来看，除了细胞球之外，还可以看到许多悬浮的小细胞，这些应该都是肿瘤细胞而非单个的肿瘤干细胞。
8 v- ^% a! k* J1 b( W% H6 h* d7 |2 t2 ?5 X2 W7 l
那么肿瘤细胞到底能否在血清培基中培养？$ I( q- U. M; k! R5 s- D6 X

5 q# G; ~" p7 v9 l! Y3 E8 P4 v干细胞之所以能生存，应该是生长因子以及B27的成分起作用。这些成分也能非干细胞性质的肿瘤细胞提供生长条件吗？

doundo

回复 zz091115 的帖子
, S5 `* s/ T$ t, q! G4 U" v  B. o, H  F( Y
如果非干细胞会在悬浮状态下凋亡，那么传了几代的干细胞，除了球之外的悬浮的单个细胞都是干细胞？
; Z+ Y7 d: n% b/ M, s9 a% E# v$ O' J" @2 k* e
我自己买的细胞株 三株都是悬浮细胞。而我养的原代也是悬浮细胞。, r! W% ]9 D/ Q5 A& k' B  p6 H
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