球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教
% u# p+ l- ~8 a, W6 Y" i( P( E! E1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。
( Z+ C" v: F& `% s- v2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？
7 y7 D( h( f! {2 C$ X0 w2 X' l3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。
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% ~% U0 ?6 v, b- s3 x$ g谢谢！！！！！！

doundo

回复 bin 的帖子
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4 S1 V. k5 r( ?+ ^0 n$ z! e请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？0 Q/ D+ Y9 w; E+ b6 z  U
  `; {8 d# l4 J- E" x
至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。8 C3 A8 W0 k  w1 _2 k2 B
如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：: w! Y8 I/ w, O2 Q% I
生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。
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但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

回复 meister 的帖子& o/ Q+ f- I. T$ J; V7 S

6 \( {1 {2 V7 f. L感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

doundo

回复 shen_coco 的帖子
+ N- A3 b) V6 e6 ^; Y& q& A
% \6 @; |* [  h  m感谢shen-coco
0 E* v- k) z- N* `, c. n( R我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。
, G+ x% r: Q+ ]
4 A0 }, Z2 q# {$ {5 O8 X2 n+ `我想请问下，8 P. @' L+ n" S% _" V# l# Y
为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？4 I, r9 T1 j, M. R
我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

doundo

有朋友问我qq 我没有权限发送消息，只好贴在此：19586420 欢迎交流

doundo

回复 shen_coco 的帖子' p4 d$ W! M1 `9 b1 U7 L
  s3 T" ]# \( r, ~$ F" U2 Q
感谢您的解答。
, v& |& x5 ]+ X% t7 x3 o: `. \: z我有三株肿瘤系细胞株，加无血清培养，细胞增殖很快。. m1 r/ l& H" w/ `. Z* j! M/ C
此外，从我样的原代来看，除了细胞球之外，还可以看到许多悬浮的小细胞，这些应该都是肿瘤细胞而非单个的肿瘤干细胞。* @! E4 d9 e! g& P

; q* T8 a0 ?- D( Q) Q那么肿瘤细胞到底能否在血清培基中培养？
% U' j1 r0 w% a2 W1 @+ D! J+ X; u# ]& b0 n  L  W) a2 H
干细胞之所以能生存，应该是生长因子以及B27的成分起作用。这些成分也能非干细胞性质的肿瘤细胞提供生长条件吗？

doundo

回复 zz091115 的帖子
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' m- K! I  l0 }/ E- H" d如果非干细胞会在悬浮状态下凋亡，那么传了几代的干细胞，除了球之外的悬浮的单个细胞都是干细胞？* L" P% O) z/ E; \
) a* c! Z; b9 [5 K: P8 v
我自己买的细胞株 三株都是悬浮细胞。而我养的原代也是悬浮细胞。
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