球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教# F7 f0 L. J+ V; P* w6 o" f8 D$ k2 R
1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。- c( _7 Q4 j  n7 N& F
2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？& d! \+ H3 |. l( G( V3 m3 k2 p
3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。. n! I4 @' H/ L. ]" D' U

; F# m$ \+ Q$ m+ e* T+ }% x0 H' s谢谢！！！！！！

meister

回复 doundo 的帖子# q# K* u& Z, n1 r% b& {* x- C

( F/ p2 p& ^* ~9 o悬浮细胞细胞当然也会死。 可以通过离心，更换培养基， 去除死细胞。

bin

回复 meister 的帖子' f% r8 r& X# L% w

+ I- f* F) D! V" c我想请教一下，有时候悬浮细胞培养的过程中会产生很多的细胞碎片，怎么去除这些细胞碎片呢？

doundo

回复 bin 的帖子. c  V6 W* l) R% g) Y1 u4 @4 w. Z
0 U+ ^. l; ?$ J0 H7 ?
请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？* v1 h) J/ @& t0 j& d
, n* E" C5 j8 Y/ b
至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。6 X, H! ^; n1 V. \8 U
如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：3 U! F& T0 V! ]1 e
生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。4 c& M1 I2 @% c

" G3 C2 ?$ _# B: P% d但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

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5 p' u7 X6 H1 X9 [7 h& H1 |; v
8 |) K  l% s. l4 T感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

meister

回复 doundo 的帖子) x. d5 Z; n  l: p- [

2 Y( B) R( E3 s' [8 X任何细胞都会死的， 肿瘤细胞，干细胞也会凋亡。只是程度不同而已。血清和好的培养条件，细胞因子等只是是细胞生长状态更好而已。 凋亡是不可避免的。培养条件好，细胞增生快， 细胞凋亡死亡少。
6 X# W! x0 R) _, a$ A. E$ g

meister

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8 d( y( F% ^8 s4 _9 s, f! t" A, ?9 ^6 R1 d
细胞碎片可以通过离心去除， 但不会很完全。

shen_coco

多培养几代，杂细胞就会越来越少的

doundo

回复 shen_coco 的帖子, L6 ^9 r4 ~# g4 ^6 ~
5 x8 k+ y8 H9 o& Z
感谢shen-coco
4 z, X( C3 j  g, L我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。$ K; \+ c1 {' ~2 n

6 s3 q: K! `! U: V0 }2 f, {我想请问下，
; Y! r9 E6 G" S! o5 u为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？" B0 j& ^: _' D% g/ Q8 f: N* S7 G
我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

shen_coco

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6 S( m0 F3 [8 }8 e
: V# [; L- q  j干细胞培养基缺乏血清，一般的肿瘤细胞可能在干细胞培养基中难以生存，至于干细胞为什么可以在其中生存，我也没有特别的去研究，只是看到文献中用这种方法可以富集干细胞，我猜可能干细胞细胞周期较慢，需要的营养物质更少吧。