球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教6 S6 _( d+ J- A( _6 H
1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。$ x+ f; Q# D4 |: Y% x
2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？
" V$ t- i0 ?3 X+ R: r' H3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。
/ C" j4 R1 I7 z. u) p! e, z/ D! I5 ]# h$ ^; @# @9 O7 e$ C1 I
谢谢！！！！！！

meister

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9 @9 H9 Y. C2 M/ p$ W) h
, g# w5 k4 z& M) D& i悬浮细胞细胞当然也会死。 可以通过离心，更换培养基， 去除死细胞。

bin

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$ h( l( G! Q( H0 C; o( C" L$ Q9 A# u# z- P6 ~
我想请教一下，有时候悬浮细胞培养的过程中会产生很多的细胞碎片，怎么去除这些细胞碎片呢？

doundo

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6 s. _  r  L( Q: g7 y0 i- D
# `, A2 Q# {( G9 q; w, y请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？
% f' A* _# y: H  K( u7 [  C: H/ q8 Z% j- t+ _0 M3 o
至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。7 z2 e: y8 Z: j' e, z
如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：
/ a- a5 B" k+ h* }; }生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。
) I0 M. f% l( ^$ ^9 a% L- q0 u* h
但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

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( `: L  g  U- J6 h( [$ |/ |$ T. _' I3 L6 a( }5 _: ?; v( F; _
感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

meister

回复 doundo 的帖子, _7 ?4 p! Q. x! {9 n

1 u; P& m/ ]) M0 P任何细胞都会死的， 肿瘤细胞，干细胞也会凋亡。只是程度不同而已。血清和好的培养条件，细胞因子等只是是细胞生长状态更好而已。 凋亡是不可避免的。培养条件好，细胞增生快， 细胞凋亡死亡少。; v9 C: b  B0 J. y0 q3 l' f3 z

meister

回复 bin 的帖子4 M5 o, g3 \6 u' ~) m6 w

" y& t: T9 a) _$ ^4 ^$ v细胞碎片可以通过离心去除， 但不会很完全。

shen_coco

多培养几代，杂细胞就会越来越少的

doundo

回复 shen_coco 的帖子) ~# x0 v7 X5 W& Q

% [5 U! S/ B! W( P- i. c  c/ o感谢shen-coco 2 B2 l/ |- q* x8 V7 p
我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。
2 z5 ~8 y4 |, Q& }% _. x5 o8 w  o/ w/ r5 H
我想请问下，" A1 D; k1 {8 W" e
为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？
7 e) \9 X1 m- g7 n我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

shen_coco

回复 doundo 的帖子7 X+ d/ N. r/ H* {- [
; R- k9 d0 t( Z# L2 L9 T
干细胞培养基缺乏血清，一般的肿瘤细胞可能在干细胞培养基中难以生存，至于干细胞为什么可以在其中生存，我也没有特别的去研究，只是看到文献中用这种方法可以富集干细胞，我猜可能干细胞细胞周期较慢，需要的营养物质更少吧。