球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教: P/ E& n" H) K- K% k
1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。
7 v2 X; ^, u6 @- E- P9 y2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？
+ j7 u2 t9 }+ n4 f1 A+ k3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。* I# P6 _* Z9 r, k* i" B2 R
) }+ e" z* O( c# f
谢谢！！！！！！

doundo

回复 bin 的帖子
; Z7 ~: Y5 v  ]+ `. t5 s& \- B7 i1 ^5 I" m8 W5 H
请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？0 P* O; q; y# K' @9 m3 J
5 C/ j; R) a- v  l% V  @8 S
至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。
3 Z7 l5 S. ~* f" M- l/ S" [如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：+ ^9 J) k3 P8 y/ M8 [
生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。
. i3 z/ [* i" h4 u; P! u; o5 d9 v' {' Y1 P; W2 `( H+ w+ R
但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

回复 meister 的帖子% q7 |* `6 q. ~7 W9 K
  a7 e' v( E- _$ e/ o, Z
感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

doundo

回复 shen_coco 的帖子1 Q/ S1 \9 A6 n- L( M
* p0 y7 S8 L: x. ]" R1 n8 v# b
感谢shen-coco
8 d" ], h% e- @" ?我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。2 q. W% y/ R. \. w# f( T. k& C

1 P# ]% t/ f; U( X$ b我想请问下，$ M, X; q0 v% m% K, d
为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？
7 X) j# J8 b( a) |  R! E9 g我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

doundo

有朋友问我qq 我没有权限发送消息，只好贴在此：19586420 欢迎交流

doundo

回复 shen_coco 的帖子
$ _  }/ ]: A& Z: [2 {$ c5 @' [/ c
9 i; J% @( q7 v; W' M% B& U% j感谢您的解答。, g6 J0 b! f0 n$ }! z" m  ?% q
我有三株肿瘤系细胞株，加无血清培养，细胞增殖很快。
/ T  k, e& v2 a5 j, ?+ i  D此外，从我样的原代来看，除了细胞球之外，还可以看到许多悬浮的小细胞，这些应该都是肿瘤细胞而非单个的肿瘤干细胞。
8 R, _& W9 p$ c5 q! [9 w, \
7 d* h- ]6 @/ \) O1 J7 C, k那么肿瘤细胞到底能否在血清培基中培养？. Y! ~$ `6 n" y) R: |! ?2 g# O+ u

# O: t5 }5 ?# q' S7 c: g干细胞之所以能生存，应该是生长因子以及B27的成分起作用。这些成分也能非干细胞性质的肿瘤细胞提供生长条件吗？

doundo

回复 zz091115 的帖子, k' V* H9 W, P6 x7 P9 ]
7 \& G0 j2 g! b! W+ Q8 F, n
如果非干细胞会在悬浮状态下凋亡，那么传了几代的干细胞，除了球之外的悬浮的单个细胞都是干细胞？  m) \' G. \8 C, X4 V; m, S; |
, A5 v: U: u% T* G6 t$ Y; p, O
我自己买的细胞株 三株都是悬浮细胞。而我养的原代也是悬浮细胞。; Z$ A2 w/ ]! s/ ^  N5 O+ U" [

, w: b/ ]  D0 K- l2 _/ u