骨髓间充质干细胞 原代 为何不贴壁？？？

imgaga

4周龄SD大鼠，75%酒精浸泡10分钟，无菌条件下取出股骨和胫骨，放入装有不完全培养基（含双抗）的离心管里，然后拿进超净台，去除肌肉和骨膜（没有去的很干净），用注射器抽吸完全培养基冲出骨髓，用滴管充分吹散细胞，然后种瓶，一只大鼠种3个25平方厘米的培养瓶。其中一瓶是48小时全量换液，发现没有贴壁的，72小时后给另一瓶全量换液，还是没有贴壁的，最后一瓶还没有换液，打算再等一天。
& A2 }: K$ Q* H6 V- t细胞不贴壁，是什么原因呢？和种瓶之前没有离心，计数有关系吗?一般以多少密度种瓶比较好呀？+ n5 P+ v- q) }+ u  H' J
我用的GIBCO培养基，10%四季青血清。
$ g8 b2 p. [- g3 n1 f希望前辈们多提宝贵意见，我急需细胞，可就是养不出来呀~愁人呀

iceyang

第一，一只大鼠一般种一个10CM的大培养皿，才能保证密度比较合适
- u, f. {6 t' m: y. I, x% W2 l0 {" g第二，血清国产的换成进口的胎牛血清吧0 {  @" k! p1 z* a( h+ f' n
第三，种瓶之前最好离心，因为可以使部分血小板黏附在离心管壁上，计数不计数不重要，因为很多血细胞你计数了也不是特别准
# L, K$ Z! ?$ W6 u" N8 O* m/ n. R: F# i( X- q; V
祝你好运

wangzhiqi86

可以尝试20%的FBS，这样可以加快贴壁

barley

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2 y) Q) b1 Y  s8 M' b/ j# [7 g+ m: t1 U' M, l0 z
用的什么基础培养基呢？的确进口胎牛血清比较好，额外加些因子也比较好，egf，pdgf等

天枰2012

我们到也是，很奇怪，好多文献都是说6-8小时就可以贴壁了，但是经常我们到时到第三天以后才会看到梭形到贴壁细胞

天枰2012

用的什么基础培养基呢？的确进口胎牛血清比较好，额外加些因子也比较好，egf，pdgf等

0 S9 M  P8 c' O3 ^' S
如果原代就加因子，会不会有其他细胞也贴壁？

天枰2012

好多文献说6-8小时就可以贴壁，我们的细胞也是要三天以后才会看到贴壁

天枰2012

好多文献说6-8小时就可以贴壁，我们的细胞也是要三天以后才会看到贴壁

hygene

换培养板试试，有的培养瓶可能是不容易贴壁。

barley

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( @) b, T4 T6 z9 l# u+ o  T( N% s其实细胞因子的选择性比血清好多了。