骨髓间充质干细胞 原代 为何不贴壁？？？

barley

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3 J7 @4 ]% Q- ]9 q5 }4 J原代培养的时候骨髓里的细胞适应体外培养环境也是需要时间的，的确6小时开始有细胞贴壁，都贴壁就比较久了。如果起始密度大的话，过夜就可以得到需要的贴壁细胞量了。

meister

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& m: K" B: w. B/ D5 x8 |. a' F
细胞用ficoll离心分离。
. G9 Q9 B3 i( Q; {! w培养瓶明胶预处理1 k0 U7 Z9 V& v# A$ q$ w
改善培养条件，加生长因子

imgaga

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, Y2 Z1 @" D. P: W7 ?4 Z怎么用明胶预处理呀？明胶有百分比吗？

athena1988620

我觉得再等等吧，我的最晚一次一周时间才找到贴壁细胞，不要放弃任何一次机会啊

meister

回复 imgaga 的帖子( D8 s9 X  t0 {0 I$ z
& p4 d" Y: D  @% [% \) B- f
有的， 自己检索一下就知道了。 sigma也有现成的产品。
9 c' ]) {) x3 H8 _2 q( w/ D明胶应用很简单。 加入培养瓶， 孵育30分钟以上最好。吸出溶液， 备用。

wanglijing2011

回复 imgaga 的帖子, B/ a  e/ ^2 R1 H
0 Z/ |0 L4 n+ o8 u8 b  q
我取材小鼠的骨髓原代细胞培养，3只老鼠的骨髓细胞接种2个10cm的培养皿，一般是24小时之后换液，已经有部分细胞贴壁了，换液吸出的上清可以再接种一个新的培养皿，会有细胞再贴壁，也可以48小时或者72小时后再换液。自己认为可能有一些影响因素：0 P! D' k( t. B* P9 \3 v& C0 v0 U
1、老鼠处死消毒后尽可能快的将骨髓内细胞冲洗出来，采用完全培养基接种，血清尽量采用进口的，可以不用任何生长因子。' s# K( j- @: D4 U9 S  u
2、操作过程要轻柔，习惯吹打不要过度，否则会对细胞造成机械损伤。) ^& w1 `& h. T8 f" r4 O/ s, O# P
3、文献报道说7，8个小时贴壁，不一定要完全一样，尽量24小时后在观察或者换液，太早移动培养瓶或者培养皿可能会影响细胞贴壁。7 R' U; f  \% S# c
4、接种密度要适中，这个条件可能要自己摸索了，红细胞太多，计数是很不准确的，太密了细胞长得很快，容易老化，太稀了细胞贴壁和生长都很缓慢。
6 o' x# ?5 }% p3 n0 O  g5、操作过程中注意污染，如果培养基中加了抗生素，早期的污染可能不明显，但是会影响细胞贴壁和细胞状态。
" I9 o5 B4 Y. G" I操作过程中的一些体会，仅供参考，希望能有点帮助。5 N# E6 Z$ p) p+ Q& i* g9 g1 u

6 Q. r1 F. j/ [5 z

daviegao

浸泡时间过长，５ｍ足够。
) d9 ]# J( _7 ^$ c" d% H0 m也可不浸泡酒精，局部消毒后无菌技术快取下肢骨。1 `4 v, ^7 z7 n6 B
15％FBS 足够。
# l1 y. I1 t8 ~9 k

麻团

你用的什么牌子培养瓶？换换进口的试试。
: l$ f* F9 s; F: i  ~# h7 P可以再等等，有的可能已经贴了但是没有完全铺展开呈现经典形态。