骨髓间充质干细胞 原代 为何不贴壁？？？

barley

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3 f& V' d5 y* R4 q# T
原代培养的时候骨髓里的细胞适应体外培养环境也是需要时间的，的确6小时开始有细胞贴壁，都贴壁就比较久了。如果起始密度大的话，过夜就可以得到需要的贴壁细胞量了。

meister

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% l* j7 ^8 V; t$ }9 h# G. C6 W$ b4 L1 a' f) Q4 b0 _
细胞用ficoll离心分离。  Q! H+ c9 F( I( K" [
培养瓶明胶预处理- G/ b* J8 C/ c7 u
改善培养条件，加生长因子

imgaga

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" N* k$ v: p! I8 e怎么用明胶预处理呀？明胶有百分比吗？

athena1988620

我觉得再等等吧，我的最晚一次一周时间才找到贴壁细胞，不要放弃任何一次机会啊

meister

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$ [; d4 p  g* E& L
  `6 p0 X' N/ z0 E' ?" c( C  [有的， 自己检索一下就知道了。 sigma也有现成的产品。6 D5 t2 B% W3 y" O7 q" b# M
明胶应用很简单。 加入培养瓶， 孵育30分钟以上最好。吸出溶液， 备用。

wanglijing2011

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: W8 Z- l2 v- M( T/ b
  }+ |. J" Q0 V* P0 ~4 G我取材小鼠的骨髓原代细胞培养，3只老鼠的骨髓细胞接种2个10cm的培养皿，一般是24小时之后换液，已经有部分细胞贴壁了，换液吸出的上清可以再接种一个新的培养皿，会有细胞再贴壁，也可以48小时或者72小时后再换液。自己认为可能有一些影响因素：5 a9 a, Y2 ]8 a  H- [. s! a
1、老鼠处死消毒后尽可能快的将骨髓内细胞冲洗出来，采用完全培养基接种，血清尽量采用进口的，可以不用任何生长因子。
1 u, `0 N/ P0 ~& e2、操作过程要轻柔，习惯吹打不要过度，否则会对细胞造成机械损伤。
; e& Q, k0 ]1 E7 M( W3、文献报道说7，8个小时贴壁，不一定要完全一样，尽量24小时后在观察或者换液，太早移动培养瓶或者培养皿可能会影响细胞贴壁。' ~2 U* V8 X; ?" u0 k
4、接种密度要适中，这个条件可能要自己摸索了，红细胞太多，计数是很不准确的，太密了细胞长得很快，容易老化，太稀了细胞贴壁和生长都很缓慢。3 H7 x) P/ F( ~# {
5、操作过程中注意污染，如果培养基中加了抗生素，早期的污染可能不明显，但是会影响细胞贴壁和细胞状态。9 j- c- X% ^8 A7 [$ E% N
操作过程中的一些体会，仅供参考，希望能有点帮助。9 I$ N: h! k1 X% `

) h0 N2 X! ~- K+ e" z" E

daviegao

浸泡时间过长，５ｍ足够。' z' y5 ~" \( F& g! R
也可不浸泡酒精，局部消毒后无菌技术快取下肢骨。
; f$ A0 V+ I* a15％FBS 足够。
8 E) j+ T# m; f6 U# V- l

麻团

你用的什么牌子培养瓶？换换进口的试试。
6 u. M8 @0 D) Z+ g可以再等等，有的可能已经贴了但是没有完全铺展开呈现经典形态。