新手ips培养18天形态请教

jefferson

这种细胞团不会是iPS, 就像大家所说的, iPS诱导出来后, 形态很典型, 镜下很容易辨认出来. 在诱导过程中, 会出现大量的不完全诱导细胞团, 就是说有些细胞也因为转录因子的导入, 细胞内基因表达谱发生了改变, 导致细胞生长及增殖能力发生了改变, 这些细胞与起始的细胞已发生了改变,但又不是完全诱导的iPS细胞,因此成为中间态的不完全诱导细胞.这些细胞在诱导过程中有的也会成克隆装生长,有的甚至有比较清楚的边界, 但跟完全诱导的iPS还是有很大区别, 主要表现在,克隆不平坦, 培养时间长后会隆起, 镜下看发黑(不是单层细胞, 透光性差的原因),克隆内部的结构也不够致密, 继续培养后克隆内部会脱落等. 而有的不完全诱导的细胞更是呈现杂乱的生长状态, 仅仅成团, 没有克隆形态, 第一张照片的细胞团个人判断就是这种情况.1 K+ j( w5 x; G( W$ l7 M2 @
9 G6 X  l; `+ J. I( r! R
这个照片不是相差的,看不清细胞团的结构. 如果有相差照片更好判断.

jefferson

jane2011 发表于 2011-11-14 12:11
! ~, p, z2 j( ~& w& r回复 jefferson 的帖子
; c1 C! P. k+ ?- C& e- q* F( N
, m! j3 u4 x& C7 e3 {* G非常感谢，学习了，那这种不完全诱导的细胞是否有干性呢？

) j& P  W( m- a& \7 N; y$ \; C这种不完全诱导的细胞是没有多潜能性的，只是增殖能力和细胞形态等方面与起始细胞有差别．
7 F! V+ ~! {0 B) _6 k' Z8 F" j! ]3 P/ l+ w% j5 y6 @
据我们观察，这种不完全诱导的细胞也有不同的阶段，有的只是形态有些改变，有的增殖能力明显增强，有的甚至可以呈现克隆状生长．免疫荧光染色后，这种呈现克隆状生长的不完全诱导细胞有的会有很弱的阳性信号．但是其不能形成ＥＢ，不具有多潜能性．

jefferson

回复 song58 的帖子+ Q3 I$ }9 {6 o) J0 A
; T: N9 P, N+ q
最开始是用AP染, 很多克隆会有比较弱的信号. 然后我们做了免疫荧光染色, 用TRA-1-60和TRA-1-81都染过, 有些不完全诱导的克隆也能在镜下看到很弱的阳性信号. 把这些弱阳性的克隆挑出来后, 其甚至可以连续传20多代, 仍然保持克隆形态, 只是和iPS或ES克隆不同, 这种克隆不平坦, 不够致密, 也无法形成EB. 因此我们推测其可能是比较接近iPS的不完全诱导克隆.
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仅仅是我们实验中的现象, 拿来大家一起讨论  z4 s/ i# J: D: z+ W

jefferson

song58 发表于 2011-11-18 10:23
1 r* y1 E- [+ f0 g  _9 K回复 jefferson 的帖子9 P$ s7 {6 _( l0 R3 f3 w
4 x) g: c' F; R: o
厉害！敬仰！说实话，我真是佩服你的耐心和毅力！

9 a! A3 U- Q& f2 l# m1 S+ s' V看到这样的克隆, 我也是比较奇怪. 所以就顺带的把几个这样的克隆一直养着看会有什么样的变化, 后来因为方向不同,就没继续了. 0 p- L  k9 S% X1 p" p+ |+ m
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对于你的问题: # x: ?! A! O9 T! a% {* j
1. 我是用逆转录病毒转的四因子加GFP做的, 在这种克隆中, GFP表达非常弱, 但又不像完全诱导iPS克隆那样是完全沉默. 镜下能看到类似背景信号的荧光, 但不好下结论其完全沉默了. 4 B2 ~$ p) f; l1 R- @. l
2. TRA-1-60以及81的染色中, 信号很弱, 但和背景比, 在普通荧光显微镜下(非Confocal), 还是比较容易观察到的, 但和ES或者完全诱导iPS那种很亮的结果比还是有很大差距. 那种完全诱导的在镜下快速的扫片就能发现, 这种不完全诱导的仔细观察才能看到.
7 P2 t) H& C  k9 {$ w" i3. 这种克隆比较奇怪, 传了20多代形态上和前几代基本相同, 增殖速度和ES及iPS差不多, 基本6天传一次. 每一代中, 散了的克隆,或者说失去形态的克隆比较较高, 但大部分还是能保持克隆形态的.
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& X* z" h4 R- f4 n) E这种克隆及其不完全诱导机制很多人都在关注和研究, 因为我们的方向不是这个,所以就没做了. 希望有做这个的同学或老师能有所突破.