刚买回来的条件敲出鼠大家都做鉴定吗？

bobo198666

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你们有rosa- loxp-stop-loxp-EGFP report小鼠吗

echowdk

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" {: T% H. X1 u, z( m- ?6 `! d6 i那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？

echowdk

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echowdk

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* S: G/ G5 R: z$ ~$ C6 ]( C那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？

bobo198666

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如果是从公司买的，pcr鉴定测序就够了，基因和纯合子都能鉴定出来

echowdk

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" z# R4 H8 j  e5 r+ e) E1 e: c) l) @7 G. P/ n; d
哦，我买的是cre小鼠，不带loxp的，所以你说的如果不成立。谢谢~~

echowdk

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0 Z# F' x3 {6 O* E6 W1 k  E" r$ \# u: q7 E4 C! J, T
是人家给做好的，拿到手之后还用再做southern吗，简单的验证下不行吗？另外，拿到纯合子再交配是必须的吗，是不是得根据实验目的决定？

bobo198666

目前对于knockout小鼠做鉴定只有pcr和southern两种，pcr不够准确，需测序才知道。southern则不太好做。如果是条件性敲除小鼠，一般是cre与loxp的，需杂交拿到纯合子再交配发挥功能

爱鬼鬼

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* e- G# v' n2 I' T! i) P
条件敲除一般运用loxp位点与cre酶作用
. Q* W- X6 _- F- T& }6 O( k9 Rjackson买过来的小鼠，应该是纯合子，你可以交配产生下一代，看下一代是不是杂合子；直接拿买来的小鼠也可以取外耳廓组织（大于10天的小鼠有痛觉，不宜剪取尾巴），jackson网页中有pcr的引物和条件。当然这个是用作基因型鉴定。( i* y. [% J# G6 V/ F! J
如果实在不放心可以看loxp位点插在基因的什么部位，pcr出来，连个载体，送测序，看插入的loxp是否完整，是否在所要的的位置。

echowdk

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8 `$ R1 m# N' ^7 h, U- C- i
是从jackson lab 买的，比15万要贵。要是组织特异性表达的敲除小鼠，是不是还要让它跟rosa鼠交配一下，更精确一点？