刚买回来的条件敲出鼠大家都做鉴定吗？

echowdk

实验室刚买回来几只条件敲除鼠，以前没做过类似实验，经验太少。大家帮忙说说需要做哪些实验？

dilal

保险起见，做一下鉴定，PCR检测即可不是很难

dilal

问一下你的条件敲出鼠是从国外公司买的，还是通过国内的代理？贵吗？自己找公司做基因敲出小鼠好像得15万。

dilal

问一下你的条件敲出鼠是从国外公司买的，还是通过国内的代理？贵吗？自己找公司做基因敲出小鼠好像得15万。

echowdk

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! m+ [) r3 g9 ~" }0 ]. a6 |- V; A) a' @' W- f; H9 V. l
是从jackson lab 买的，比15万要贵。要是组织特异性表达的敲除小鼠，是不是还要让它跟rosa鼠交配一下，更精确一点？

爱鬼鬼

# |$ H+ E3 ~2 F3 f2 [2 g# T6 _' x: g

' i8 J9 w0 I' o: C9 T5 D6 V条件敲除一般运用loxp位点与cre酶作用1 N0 _) c' ]: ]
jackson买过来的小鼠，应该是纯合子，你可以交配产生下一代，看下一代是不是杂合子；直接拿买来的小鼠也可以取外耳廓组织（大于10天的小鼠有痛觉，不宜剪取尾巴），jackson网页中有pcr的引物和条件。当然这个是用作基因型鉴定。! m  P5 v4 E& d+ M4 W1 Z- w- b8 x
如果实在不放心可以看loxp位点插在基因的什么部位，pcr出来，连个载体，送测序，看插入的loxp是否完整，是否在所要的的位置。

bobo198666

目前对于knockout小鼠做鉴定只有pcr和southern两种，pcr不够准确，需测序才知道。southern则不太好做。如果是条件性敲除小鼠，一般是cre与loxp的，需杂交拿到纯合子再交配发挥功能

echowdk

回复 bobo198666 的帖子; c5 z3 y# r6 ~: q) Q0 t" |

, l% e: i4 H2 V# l是人家给做好的，拿到手之后还用再做southern吗，简单的验证下不行吗？另外，拿到纯合子再交配是必须的吗，是不是得根据实验目的决定？

echowdk

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4 t5 E% O/ G0 w0 B
, t! S; v2 G/ r& ~" a哦，我买的是cre小鼠，不带loxp的，所以你说的如果不成立。谢谢~~

bobo198666

回复 echowdk 的帖子6 _3 b8 h2 G& R8 a0 I' r) U

7 n2 c9 ^1 i4 B6 b7 e如果是从公司买的，pcr鉴定测序就够了，基因和纯合子都能鉴定出来