我的小鼠骨髓基质干细胞正常吗？

bathpp2007

# X) @) w7 h) d* C6 U* r. t/ q

1 j2 A3 U: A3 {# f4 V培养小鼠BMSC多日，不太顺利" |* D% ^- ]8 Z! T, n
10月11日取4周c57小鼠三只胫股骨，冲洗物离心接种到25cm瓶中，, p% O' V0 L4 l' X
次日换液，之后隔二日换液，11月2日达90%，0.25%胰酶消化，6 v6 G( F' t3 ]9 X( x; I+ C! Z( ~* |
无EDTA（上次传代消化液含0.02%EDTA，细胞次日观察几乎全部漂浮），
" v; c5 F' ?# q全培养基中和，无离心，直接1:2接种，5小时后观察已贴壁，3日中午观察贴壁良好，
7 |4 J7 H& ~9 a0 u& u5日观察见基本如下图示，细胞薄，亮，且数量变少约三分之一，下图为今日6日照片。& N9 N0 J  m. T
& m5 e: ]) I1 s1 _8 h* o
问题：1. 我的细胞是BMSC吗？  U5 ]9 ^8 p. B
2.为什么会有一次数量的减少，是传代选择吗？（不是BMSC的细胞自然死亡）
3 n1 V2 q, B) d3.图中蓝箭头即是BMSC吗？红箭头指的圆形的是什么东西？
" @4 ^2 f6 z- T- e! R; m6 P7 N* V7 F3 B+ P" N6 n3 r
' a( m! Y& ^  C% h' A) U
P1传代后11天了，当时是1传2，共4瓶，目前生长缓慢，选较好的两瓶拍了照，请行家里手给看看  r* Z( @1 w/ a- @
用的是DMEM/F12，10血清，GIBCO；生长如此慢……样子如此丑6190563994 M# j  U8 P  u
细胞形态与上次相比有些变化，不是那么典型的“纺锤形”了 * Z- ]- ~( V/ b
: C! `" X: j$ [) ]3 o% x

5 O& d! [; a  k
& @* z: H5 U1 t6 l. S6 Q. q, ?* W4 Z6 ?

湖南干细胞

回复 hnsdlgl 的帖子
7 ]% y! H! q0 ]$ w8 v3 K. e7 }8 m9 X7 P' v+ ?2 Z" r2 D7 }* o- l
这个方法值得一试，拍瓶法。学习了。

细胞海洋

回复 fluleaf 的帖子9 G! }) X6 p6 [/ {" F; c
) N$ Z9 k4 {5 P7 l" z8 C
建议你发新帖提问& f! q0 O. m0 f; C& \

fluleaf

wanglijing2011 发表于 2011-11-16 16:34 ) O- z' @4 ], S- V; Y
回复 hnsdlgl 的帖子% C5 s# u6 u- _* _# ^# `
' e7 |) Y) q9 f9 _) o6 L3 f
你好，看到你回复的帖子，可能小鼠间充质干细胞做得比较多的，想跟你请教一下。

6 j! ?6 T7 }( L5 E3 T5 [
我的小鼠骨髓MSCs的P2，P3也是这个形态，但是胰酶消化下来，铺展得很开的立刻就消化下来了，剩下的就是跟P1差不多的贴壁很牢的细胞，分开培养后，细胞形态明显不一样了，那到底哪一群是间充质？

wanglijing2011

回复 bathpp2007 的帖子" i- i( T, k5 P3 @; Q0 R& i

  A& z/ H1 \; Q9 M( M& u消化时间不能太长，含有EDTA的胰酶在37度消化不要超过2分钟，否则细胞的形态变化会很大，而且消化下来的细胞也不是想要的细胞

bathpp2007

wanglijing2011 发表于 2011-11-21 17:53
" ~2 D/ f- w3 [( J8 ?3 O6 j回复 bathpp2007 的帖子" Z3 a1 O  O6 [2 M
; Z; D" B2 z. i% B* c
GIBCO的液体DMEM高糖培养基

% K0 E2 x* R1 g# \2 D7 L
多谢！

bathpp2007

3 i) x: W/ p2 [) a  S3 ~* S

发表于 4 小时前 |只看该作者; C& j$ J0 G9 Z5 D: d* p" S
传代之后，细胞数量减少，跟消化时间有很大关系的。消化前预留终止液，消化时间3~5min，3min的时候一定要再镜下观察，如果此时还有一小部分贴壁，适当摇晃倒出，不要等到5min。？

$ J! t& V- F. e% ?  P
  y9 N: z6 m% D. K; B多谢！

wanglijing2011

回复 bathpp2007 的帖子
  v. K) g* j, M/ z' C( L) `# C. p# Z1 q# b- q
GIBCO的液体DMEM高糖培养基

Anohana

传代之后，细胞数量减少，跟消化时间有很大关系的。消化前预留终止液，消化时间3~5min，3min的时候一定要再镜下观察，如果此时还有一小部分贴壁，适当摇晃倒出，不要等到5min。

bathpp2007

! l* B% P9 u9 Q; Y) v( J

wanglijing2011 发表于 2011-11-18 18:21 : B0 f) e& A0 k. f' C4 H( n9 [
回复 bathpp2007 的帖子
1 r, v& s! c) P: l, }5 {2 n9 m6 i% D$ E8 W$ P
我取的原代需要5天左右传代，基本3-4天长满了，基本可以再次传代了，但是觉得细胞 ...

1 c1 B$ a3 F5 U- O! {
; c% ^( R2 x) Q# m; c* E1 y, x* c谢谢指点。/ r8 y4 G) u% o8 j9 t8 f. }" J
请问你用的培养基是什么？ 是自配的还是预装的那种？3 V. [0 Q/ e- z# D: ]5 a( H$ c