我的小鼠骨髓基质干细胞正常吗？

bathpp2007

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" A1 Y  H  L1 ^/ F6 v培养小鼠BMSC多日，不太顺利" i" ]: Y! o" `' @6 u8 F( ?; r
10月11日取4周c57小鼠三只胫股骨，冲洗物离心接种到25cm瓶中，& A$ p% I- a3 W  S+ i" `
次日换液，之后隔二日换液，11月2日达90%，0.25%胰酶消化，
- M3 ~% D) f) g5 G无EDTA（上次传代消化液含0.02%EDTA，细胞次日观察几乎全部漂浮），! A1 w+ x# C! \1 b% n
全培养基中和，无离心，直接1:2接种，5小时后观察已贴壁，3日中午观察贴壁良好，
4 r# _5 I! s3 t3 V5日观察见基本如下图示，细胞薄，亮，且数量变少约三分之一，下图为今日6日照片。! o  r4 V  i% V5 u, V. A
; G; d/ l3 I! Y* ?# `0 N) n
问题：1. 我的细胞是BMSC吗？
! {) r% {. ?6 I) q% ]. d: k2.为什么会有一次数量的减少，是传代选择吗？（不是BMSC的细胞自然死亡）
- W) S0 o6 C1 c  i3.图中蓝箭头即是BMSC吗？红箭头指的圆形的是什么东西？
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/ B: G$ l5 c; K! CP1传代后11天了，当时是1传2，共4瓶，目前生长缓慢，选较好的两瓶拍了照，请行家里手给看看
) ^) p3 V5 ]* G9 f2 j用的是DMEM/F12，10血清，GIBCO；生长如此慢……样子如此丑619056399
$ [. W  ~3 Y# {2 H4 \) P细胞形态与上次相比有些变化，不是那么典型的“纺锤形”了
( C1 v7 U. `: |( R6 s
+ k2 Z6 ~/ r6 \  A  L/ b% l* x6 q) p9 e0 _, m3 w

5 G4 {9 ]% r1 w
4 K! E& i* v# X7 W+ @6 X8 {! N

bathpp2007

imgaga 发表于 2011-11-15 20:09
" C' Q$ W1 ^" u& C# e8 L9 L& g低倍镜照的不是很清楚，高倍镜下看细胞不纯，红笔标的是杂细胞，传代时应该可以除掉。细胞数量减少，也许和 ...

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谢谢！6 U: f' C6 `7 C" r2 E
- [% E. Y. L' a
细胞为什么长得这样慢呢？也和消化过度有关吗？
' C0 K$ {- x% b- y4 ~/ _这样的生长，最后得到的还会是骨髓干细胞吗？+ ?2 Y* R% a+ G% F$ K/ J. s( p
DMEM/F12应用于BMSC的培养没问题吧？

bathpp2007

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hnsdlgl 发表于 2011-11-15 20:41 8 a3 i0 f3 K0 j  l$ N. {
图中蓝箭头所示应该是BMSC，而红箭头所示可能是未铺开的BMSC或其它杂细胞。
( @: r2 j3 d0 z9 P$ M# }* Q" e1 I0 r1 a) i. G  W; }
从培养过程来看，我个人有几 ...

* Q9 A" x/ r9 R& \

' c/ ^0 s# U8 E谢谢您的热情指导！
- H6 M! z: u3 q3 ?1 V1.我是24小时换液，也试过8，48，72，感觉差别不大。换液却是全液换的，今天再做次原代，试一下半量换。传代之后就不用一直半量换了吧？
& G* W9 }1 z+ J2 h& P7 k0 m2.目前是10%的血清浓度，用过13%的，感觉上还可以，但那次传代后换成10%，细胞全死了，这次原代和传代都是10%。' ?' _! x7 J! E/ M$ n$ o
3.0.25%的胰酶消化了5分钟，没有离心，血清终止后直接传代接种的。
- H# g; y2 x8 n' M9 V
  Q: C* t" F) C6 ^: o有一次原代传代后不贴壁，细胞都漂起来了，两日后白茫茫大地真干净，是不是也是消化过度，吹打得太厉害了？

bathpp2007

卡门 发表于 2011-11-15 21:09 ; w$ G$ {! ^+ j$ y8 f# R( c
我之前养的小鼠骨髓干细胞也出现消化后死亡的情况，后来控制好消化时间就好很多了；5 J& Z- B. ~$ I6 I; e
此外，你要确定你的细 ...

+ z# t5 i( n( Y7 i% D似乎我的细胞死亡的原因就是消化时间长了: p8 _/ f: V) H; Q2 f
本次传代没有用EDTA，也没有离心，以为可以尽量减少细胞的损伤。0 g9 L# |( P2 g" \+ R( d& u, @7 {

. K4 H& i! H3 L. A7 i% PP1代已经十多天了（后面三张图），生长如此慢的原因也是由于消化损伤么？

bathpp2007

wanglijing2011 发表于 2011-11-16 16:34
# c* k/ A5 ?7 X, L: P5 `2 z7 P# `回复 hnsdlgl 的帖子6 a' O& g, o1 o5 c9 ]

( y4 M( P! [" z6 v9 ]你好，看到你回复的帖子，可能小鼠间充质干细胞做得比较多的，想跟你请教一下。

/ L: d$ d, P" b& @% \! \5 Y你好，看到你的图片觉得你养得真不错，P2P3代是刚传代的样子吗？它们长到80%左右大约要多少天？我的P1代都14天了，也就是30－50%的模样。。。。。。。。

bathpp2007

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wanglijing2011 发表于 2011-11-18 18:21
( T# M6 Q# k3 A  Q回复 bathpp2007 的帖子
7 E; x4 {  F" ^+ [' M! @3 Z+ }8 b; q' l. L. y
我取的原代需要5天左右传代，基本3-4天长满了，基本可以再次传代了，但是觉得细胞 ...

" @0 e. I! Z+ x7 f7 b% [7 l7 M
+ c, v+ z8 B6 Z8 o( ^8 b% e9 K- O
谢谢指点。9 c% b  L8 }, l$ y3 ~4 n6 B! Y* ^( Q
请问你用的培养基是什么？ 是自配的还是预装的那种？
1 }& W! Q+ i# m

bathpp2007

/ O" h6 G7 v$ Z% t, S2 H( N

发表于 4 小时前 |只看该作者- `1 X9 S% a" \  K( D. ~+ j5 V6 V
传代之后，细胞数量减少，跟消化时间有很大关系的。消化前预留终止液，消化时间3~5min，3min的时候一定要再镜下观察，如果此时还有一小部分贴壁，适当摇晃倒出，不要等到5min。？

9 \' B9 {. c+ M, U# ]2 a

0 b/ J2 F0 c: X# W2 I* Y多谢！

bathpp2007

wanglijing2011 发表于 2011-11-21 17:53
, l4 k* H, C7 q* N/ N回复 bathpp2007 的帖子
, N9 N4 z3 e( l( G9 p
- {9 H5 q0 ?, S# E9 CGIBCO的液体DMEM高糖培养基

3 d! k/ z: F. Y
多谢！