成年小鼠成纤维细胞培养

超级小葵

新手。现在在做成年小鼠尾尖的成纤维细胞培养，今天是第8天，剪碎后用15%FBS的DMEM培养基培养，到第4天的时候长出来这些东西，跟文献网络上描述的成纤维细胞形态不一样，想请教高手看一下，这是什么细胞！非常感谢。

yanjie11678

应该不是细胞，成体组织块培养细胞应该不会这么快迁出。看你照的照片这些东西和组织块好像不在一个面上啊。

超级小葵

回复 yanjie11678 的帖子8 R' r- D2 b; i! N7 ~. T9 _, O1 |
" u/ U1 N- I8 c. M- L
错了，这图是第六天照的，如果这不是细胞，那是什么呢？为什么说组织和细胞不在一个面上，组织本来剪的不是很小

jhu132llh

1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题2 v5 j9 B/ Q3 i5 z
2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3天左右将会生长到汇合度50-70%，尤其是组织块周围将会及其密集。
  i  O: G* N, {1 [7 ?7 d2 o* m3.组织培养在培养前期（前2天）请小心少动，过多移动组织皿将影响组织块的贴壁，组织块的贴壁情况直接影响细胞游离生长。

song58

话说怎么感觉有点点像keratinocyte ...

yanjie11678

其它组织块周围也有这样的东西吗？是不是你照相时调焦距的问题？我看组织块的边缘很模糊，怀疑这些东西不在细胞层面上。

超级小葵

jhu132llh 发表于 2011-11-16 16:59 - I' C( `1 B9 L* D( t
1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题
* p0 k2 l1 |7 q2 O! _4 S/ `7 I2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3 ...

  ^% y/ ^3 g; u+ K! i
我的培养方法应该没问题吧
5 D/ |% R1 I+ ?9 W  J6 t- e+ f0 i小鼠尾尖，剪碎后，在培养箱放半个小时左右，让其贴壁，然后加入培养基（15%FBS+DMEM+1%双抗）
6 l  l- L2 a9 d  x3 Z我每天都拿出来观察，组织贴壁不是太牢

超级小葵

回复 yanjie11678 的帖子* U+ a6 h- K4 H9 o) s

$ F8 M& G1 ^3 U# Y% h: d9 n) J难道不是因为组织块比较大的原因吗？

超级小葵

:'(生气啊

jhu132llh

回复 超级小葵 的帖子, b8 g3 X* `! }2 F# m
3 e8 g3 F+ ]  Q+ d+ {/ {
掏老窝子技巧，个人尝试好多方法后总结出来的，你可以试试( x6 u' ^. c* u+ h/ h6 z- Z$ e
1.可以这样，先加一点培养基，在培养皿中晃一晃让培养液均匀铺在皿底，然后加入组织块，培养
+ `& _% C: g4 ^+ N0 U2.6-8小时后沿边缘极其缓慢加入剩余培养液
# e. m5 |/ E) d3.2天不动它- H1 T! m) {8 Q6 ~6 `
4.这个是总我结了很久的较难培养的组织培养的组织培养技巧，大部分的难培养的组织培养都高效，希望对你有效