成年小鼠成纤维细胞培养

超级小葵

新手。现在在做成年小鼠尾尖的成纤维细胞培养，今天是第8天，剪碎后用15%FBS的DMEM培养基培养，到第4天的时候长出来这些东西，跟文献网络上描述的成纤维细胞形态不一样，想请教高手看一下，这是什么细胞！非常感谢。

yanjie11678

应该不是细胞，成体组织块培养细胞应该不会这么快迁出。看你照的照片这些东西和组织块好像不在一个面上啊。

超级小葵

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6 `! H( c& H8 Z9 ?5 j+ j' X5 m2 t  q3 v; ]% L
错了，这图是第六天照的，如果这不是细胞，那是什么呢？为什么说组织和细胞不在一个面上，组织本来剪的不是很小

jhu132llh

1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题
/ V6 r' G$ Z# O/ c2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3天左右将会生长到汇合度50-70%，尤其是组织块周围将会及其密集。1 \1 Q: R, ^: k. Q4 @2 ~" ^
3.组织培养在培养前期（前2天）请小心少动，过多移动组织皿将影响组织块的贴壁，组织块的贴壁情况直接影响细胞游离生长。

song58

话说怎么感觉有点点像keratinocyte ...

yanjie11678

其它组织块周围也有这样的东西吗？是不是你照相时调焦距的问题？我看组织块的边缘很模糊，怀疑这些东西不在细胞层面上。

超级小葵

jhu132llh 发表于 2011-11-16 16:59 / Z" v/ J  n0 z: U
1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题& p3 R, L7 F0 r* k2 [: g9 I3 S
2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3 ...

6 @6 r2 J( B# {, Q
我的培养方法应该没问题吧
9 N9 I# R- e3 m( @3 k0 x& B$ v3 c& e小鼠尾尖，剪碎后，在培养箱放半个小时左右，让其贴壁，然后加入培养基（15%FBS+DMEM+1%双抗）
. v* _* B- }1 }2 U我每天都拿出来观察，组织贴壁不是太牢

超级小葵

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9 j8 v# |$ U" K, ?, U. e; m# o9 U, q6 f
难道不是因为组织块比较大的原因吗？

超级小葵

:'(生气啊

jhu132llh

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% O! H& I. R! i4 E. }. S* `7 c4 S3 y+ v6 y
掏老窝子技巧，个人尝试好多方法后总结出来的，你可以试试
- {3 W. h9 G) O$ |& n) h) a0 n; W1.可以这样，先加一点培养基，在培养皿中晃一晃让培养液均匀铺在皿底，然后加入组织块，培养: u% Y  e! L6 K) z# ]/ c
2.6-8小时后沿边缘极其缓慢加入剩余培养液
, d# j. G- g; t( \8 P2 t: h/ {3.2天不动它5 c2 v6 Q# x% ^5 \; z- q+ i
4.这个是总我结了很久的较难培养的组织培养的组织培养技巧，大部分的难培养的组织培养都高效，希望对你有效