成年小鼠成纤维细胞培养

超级小葵

新手。现在在做成年小鼠尾尖的成纤维细胞培养，今天是第8天，剪碎后用15%FBS的DMEM培养基培养，到第4天的时候长出来这些东西，跟文献网络上描述的成纤维细胞形态不一样，想请教高手看一下，这是什么细胞！非常感谢。

yanjie11678

应该不是细胞，成体组织块培养细胞应该不会这么快迁出。看你照的照片这些东西和组织块好像不在一个面上啊。

超级小葵

回复 yanjie11678 的帖子1 N+ b0 w7 m& m  f

) N* K- b5 ^$ _5 B7 q  H错了，这图是第六天照的，如果这不是细胞，那是什么呢？为什么说组织和细胞不在一个面上，组织本来剪的不是很小

jhu132llh

1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题
" x7 m# E% c3 r& A2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3天左右将会生长到汇合度50-70%，尤其是组织块周围将会及其密集。
* p% M3 r: {/ A# D5 ~) @; @3.组织培养在培养前期（前2天）请小心少动，过多移动组织皿将影响组织块的贴壁，组织块的贴壁情况直接影响细胞游离生长。

song58

话说怎么感觉有点点像keratinocyte ...

yanjie11678

其它组织块周围也有这样的东西吗？是不是你照相时调焦距的问题？我看组织块的边缘很模糊，怀疑这些东西不在细胞层面上。

超级小葵

jhu132llh 发表于 2011-11-16 16:59
8 s8 z5 H, @9 E1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题$ d% E; k/ X  e" S* a$ V/ B; F
2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3 ...

% C# d) n# u) K3 r( d我的培养方法应该没问题吧
4 w# ~4 n0 C, {& ]+ y小鼠尾尖，剪碎后，在培养箱放半个小时左右，让其贴壁，然后加入培养基（15%FBS+DMEM+1%双抗）, `- H3 l7 \  N1 J4 f' y7 F
我每天都拿出来观察，组织贴壁不是太牢

超级小葵

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- m* O7 o0 `! r# f& }8 C8 |- ?+ A
# t5 y2 [3 m1 K  L7 t( o' o难道不是因为组织块比较大的原因吗？

超级小葵

:'(生气啊

jhu132llh

回复 超级小葵 的帖子, e8 Q0 p. L* D- [- H2 w

6 H3 M9 d5 O% j, \" y1 Z掏老窝子技巧，个人尝试好多方法后总结出来的，你可以试试5 Z+ m: O0 z4 i
1.可以这样，先加一点培养基，在培养皿中晃一晃让培养液均匀铺在皿底，然后加入组织块，培养  F( g) X( T9 u6 R! V1 c; R
2.6-8小时后沿边缘极其缓慢加入剩余培养液
( F8 o$ O. H1 s# }3.2天不动它
. x: v7 q0 L: O4.这个是总我结了很久的较难培养的组织培养的组织培养技巧，大部分的难培养的组织培养都高效，希望对你有效