质粒浓缩 自己的小尝试

huangcong1988

我想把提出的质粒，直接加上酒精，然后混匀，过柱，完了之后直接加水（一半体积的水），这样能使质粒浓缩么？  i1 p$ ^5 S( W% u

: [; D9 }1 ~; @. z' z补充内容 (2011-11-18 16:30):
  [5 p- r8 C- {9 {酒精体积为质粒体积的三倍

寂静兔

+两倍体积无水乙醇，和1/10体积5M NaCl，离心即可沉淀  }  D  j! F3 n8 A$ d1 d; }  v
用水溶解就行

星移龙一

我这有一套浓缩的步骤，而且可以消除蛋白。
$ I! T" v6 l% c( X# m: b
3 Y: s, T  L/ o  z( T. I无菌处理（对DNA进行浓缩和无菌处理，可直接用于后期细胞的转染实验）  c6 t- J3 \3 Y8 e  _
通常最后溶解用500ul灭菌超纯水（不足时用水补足）1V，转移至EP管
' w& w: @" U" q; z3 Z↓
- `# {$ w& D" m. K加1/10V 3M NaAc（50ul）+2V无水乙醇（1ml）, V2 V4 d. ]& k2 E+ n
↓7 I0 K: B- v4 a& P) X
-80℃,15~20min
* p8 B7 v/ E- d( i/ P* e↓
$ d% A. n1 \2 z# u≧13000rpm,15min- r+ R- g/ d1 W6 C7 s+ {" g; ~
↓8 T! o; R0 p# z- E
小心吸弃上清，加入 1 ml 70%乙醇洗涤沉淀及整个管子内壁（可以把沉淀弹起） ；然后13000×g 离心1min 收集质粒沉淀。吸弃上清，注意不要把沉淀吸走；
; v; `7 Y6 P- ^  g0 c- U. U7 l↓; F  j, M; O% A2 V- z
   （可重复洗涤一次） ' Y9 R0 Z) q3 C4 T
↓
$ o- ?" s8 z* p: h把离心管置于离心机稍为甩一下（离心几秒） ，把管壁的残留乙醇离下，然后用小枪吸走管底的乙醇液体。
: t( W$ B' u5 J' ~8 p$ U↓
) [) ^7 @& ~, d% N- H$ E$ v# r开盖干燥，让其风干，直至看到一层薄膜状（透明） (10~15min); e% ?! u' p% n3 `6 f- p3 m
↓
/ |! f* H6 u8 W1 l即可加入（40~60ul）超纯水溶解，由开始的沉淀团块大小决定。
, r# w8 G( m* X& }（取2ul至78ulddH2O测其浓度及OD）
$ a4 {% {7 I$ u& T

开心果王

楼主有没有用过omiga大题的盒子，里面有浓缩的步骤啊！可以搜索一下，直接用酒精会不会损失太大啊，好像中间要用到NaHAc的！

sizhengliu

QIAGEN的说明书关于浓缩的步骤是这样的：（15mlQF洗脱后）1 z9 s) s0 w% N$ K' e; ?8 B
1，10.5ml异丙醇加入，4度离心15000g，30分钟，1 B8 ]* @! @9 t3 O( r& K* _# |& p
2，弃上清，加入5ml 70%乙醇重悬沉淀，离心15000g，10分钟( l- ~" }: Z4 ^6 ~
3，弃上清，风干
3 K) x: h& t9 e3 ~这时，你可以根据你想要的浓度，加入适量TE或纯水溶解沉淀。

梓玥

用真空浓缩机也行的。

张也行

这个要看你原来的质粒浓度多大了，如果是大提的，浓度很高，那么上面浓缩的方法都可以，如果你的质粒浓度很低，那么用上面的方法浓缩（除了用真空浓缩机），最后估计什么都没有了。因为任何一种浓缩方法都会出现损失，一般情况下起始浓度越大，损失率越低。

huangcong1988

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5 y- S( x& l! N4 Q/ T8 |4 s$ u7 I9 L4 q, {0 U
大提浓度高？应该是不高吧？经验告诉我们，大提量比较大，但是一般浓度不高吧？起始浓度越大，损失率越低，这个是为什么呢？

张也行

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) B* S! s, ]' u! A$ Q' {5 h  o! L9 Y$ K" I
你们实验室小提浓度比大提高？！估计和你们用的试剂盒有关吧，我们这边都是大提浓度高~/ t! D; u% {/ x

" t; f* s2 D% X7 _6 ?; q9 b至于起始浓度大，损失率低这个也是我的个人经验。你可以试试。

huangcong1988

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5 G5 s& _* M- i; F7 E1 K
  {2 I( A+ K' V( W+ Z+ E恩，我们用omega的，一般情况下是小提质粒浓度比大提要高，但是小提的量是没法跟大提比的