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zerollx

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楼主

发表于 2011-11-20 18:50 |显示全部帖子

以RNA为模板是P不出来产物的，若有条带，那说明你提的产物有基因组污染，是不能做后期分析的，除非你用的反转录试剂盒里含Dnase那就另说了，这就是RT中的No RT control。标准的做法是以cDNA为模板做标曲，因为其可以更真实的反映模板的扩增环境。但是这样做会消耗大量的cDNA，这就意味着你需要制备大量的样品，会非常麻烦。一般我们会选择以cDNA为模板，用你的待测和内参基因分别做2次普通PCR再纯化，以收集大量的纯化片段，再以此为模板做标准曲线。