请教大家MEF的问题，my nightmare！！！

meiying3061

1、大家做MEF的时候，用的都是什么培养基？那个公司的？培养基配方？
2 k% a& [, Z0 t2 ]$ z- d2、MEF都是几代可以用丝裂霉素C处理？3 _0 @& l" L( M0 W
3、MEF传代频率（即几天可以传一代）？传代密度？+ t5 T3 L; _& c8 g* f
我的问题：我基本是3天传一代，一般传到P2时，细胞就只是铺展变肥，但是并不分裂，就是说数量根本不变化，到底是什么问题呢？谢谢各位同仁指导。

zhusealin

我们用的液体的hyclone DMEM高糖，血清也是hyclone的，传到第三代辐照或用丝裂霉素处理。1:3传代，MEF长得挺快的，我们基本上是2天传一次。你的情况有可能是传代密度低了，MEF传代密度低就长得慢了，容易老化。做原代的时候也要注意一下，胰酶不要消化过头。我们做原代的时候，都会留有一些没消化完的组织块。

meiying3061

回复 zhusealin 的帖子. G5 h& s" }2 \! ]  a6 X; t; F1 X

/ \2 r- M; {: T5 r' t4 a" G我是1:2传的代啊，用的培养基是hyclone DMEM 高糖，四季青的胎牛，P0和P1长的都还挺好的，就是到了P2之后就张不好了，我现在呕死了

song58

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3 Q& m1 x$ X$ o- R6 v( ]. P
1 x! k8 N: I5 n  D四季青是啥？5 [/ N6 Y. l5 b' ]

% w5 a6 \6 N. Y4 Z" ^' G; \. ^建议使用进口血清
7 o! {- n. Z. P3 _6 J! ~; D  ^不是崇洋媚外，是有时候国产的真不好用啊...尤其是做feeder养ES的时候

genedu

血清的问题，用GIBCO的血清，问题一并解决9 ~# m7 _1 M+ }

郭小妹

我们用的是进口GIBCO的高糖DMEM Hyclone的血清，配好液体后还要过滤，长到5代以上都没问题，1:3或1:5传，3-4天长满；丝裂霉素C处理一般用3-5代的。

meiying3061

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1 h: J0 Y' A" v$ O" Y
7 \% b8 {6 P( h2 R6 {/ L# c: S谢谢同学，我换了进口胎牛，细胞现在长的很好，非常感谢。