请教大家MEF的问题，my nightmare！！！

meiying3061

1、大家做MEF的时候，用的都是什么培养基？那个公司的？培养基配方？
- p5 H- Y" B7 Y5 Z& U7 U2、MEF都是几代可以用丝裂霉素C处理？
+ Q; Z: E( p# k! g# Y& s% w) L( }3、MEF传代频率（即几天可以传一代）？传代密度？
9 B, T+ g" p# T+ ~: z, H! W+ }我的问题：我基本是3天传一代，一般传到P2时，细胞就只是铺展变肥，但是并不分裂，就是说数量根本不变化，到底是什么问题呢？谢谢各位同仁指导。

zhusealin

我们用的液体的hyclone DMEM高糖，血清也是hyclone的，传到第三代辐照或用丝裂霉素处理。1:3传代，MEF长得挺快的，我们基本上是2天传一次。你的情况有可能是传代密度低了，MEF传代密度低就长得慢了，容易老化。做原代的时候也要注意一下，胰酶不要消化过头。我们做原代的时候，都会留有一些没消化完的组织块。

meiying3061

回复 zhusealin 的帖子" j; z, W! m9 J) l
9 |% x* u; n9 L2 `2 S) t5 b
我是1:2传的代啊，用的培养基是hyclone DMEM 高糖，四季青的胎牛，P0和P1长的都还挺好的，就是到了P2之后就张不好了，我现在呕死了

song58

回复 meiying3061 的帖子" g; ?4 ]8 s; V! W

) X" l  `$ A- l* \: F: Q% I四季青是啥？
. U2 V/ K9 b" ^% N. R
$ |: _8 z+ P0 E2 U; e  _建议使用进口血清
6 h* {/ X, Y  v, W不是崇洋媚外，是有时候国产的真不好用啊...尤其是做feeder养ES的时候

genedu

血清的问题，用GIBCO的血清，问题一并解决
( ]& y. i) t' H6 O$ b' [

郭小妹

我们用的是进口GIBCO的高糖DMEM Hyclone的血清，配好液体后还要过滤，长到5代以上都没问题，1:3或1:5传，3-4天长满；丝裂霉素C处理一般用3-5代的。

meiying3061

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谢谢同学，我换了进口胎牛，细胞现在长的很好，非常感谢。