还是成纤维细胞培养的问题

超级小葵

之前发过帖子，成纤维细胞一直没有培养出来。
# ^5 p! i- R1 c& p* Z! r会不会和老鼠的年龄有关系呢，我取样的老鼠年龄有两百多天了？
6 ]' [  v3 C4 Q5 t4 G求高手帮帮忙！

kastanie

做过好几次取皮肤原代成纤维细胞的试验了。个人感觉能不能成功最重要的一步是皮肤的组织碎块是不是贴壁。) m- `' x% F$ s/ M* t; @  z  f+ V
我取的是人的皮肤成纤维细胞，没有加胰酶消化。具体步骤是：将皮肤减成小块，培养皿中放10min左右略微晾干，让皮肤快粘在培养皿壁上，然后缓缓加入少量培养基，37度培养，隔天再小心补点培养基，开头2-3天尽量不要去动培养皿，不要过多观察，防止组织块飘起来，一旦飘起来，我的经验是基本就成功不了了。

jane2011

组织块第二天就贴壁了，如果是人的，4天左右会有HFF爬出，13天左右收获HFF，爬出时间也根据取材人的年龄有所不同。还有你的皮肤组织处理的是否干净，如果有很多结缔组织或脂肪残留，也不容易爬出细胞。没做过鼠的，上面是人的皮肤的经验。

天枰2012

用的老鼠也真够老的!呵呵。应该可以分享出来的，只是可能需要时间长点（十天左右吧）。5 N$ A" f! j/ G# B- v8 N& L
另外，如果加液晚的话，组织块太干了，也不会有细胞迁出的

请问十天左右是指贴壁时间吗？如果是贴壁时间怎么会这么长，还有人的又会是什么情况呢？

超级小葵

回复 varing 的帖子+ K4 u8 K, v% b5 j6 s
1 c7 a: }, o/ Q" Q4 I
好的，我试试，非常感谢

超级小葵

回复 liufutang 的帖子
7 g$ A* b7 h( d1 B
  W* m* y( @/ }" E* m$ R- _7 ?谢谢

varing

剪碎点，用0.25%的胰酶消化15-20min，肯定有组织块，直接加到培养皿中，加常规培养液体积的1/3-1/2左右，培养液不要太多，让组织块贴好，第二天或者第三天贴好后加培养液至常规体积。
# A- g$ h) g7 y, v2 k* Q% @7 D这个应该可以的

liufutang

老鼠是有点老了 我所试过的用6周的小鼠采用组织爬出的方法很好 现在已经培养半年基本建系了。要是消化方法的话我建议用0.125浓度来消化。

liufutang

老鼠是有点老了 我所试过的用6周的小鼠采用组织爬出的方法很好 现在已经培养半年基本建系了。要是消化方法的话我建议用0.125浓度来消化。

274996064

可以剪碎一点儿   用平常的胰酶浓度就可以了